一、人羊膜联合自体角膜缘移植治疗严重眼部烧伤的观察及护理（论文文献综述）
吴艳菊[1]（2021）在《含LSCs的原代角膜缘上皮细胞片自体移植对犬大面积角膜损伤的疗效研究》文中提出角膜缘干细胞缺乏症（Limbal stem cell deficiency,LSCD）是由于角膜缘干细胞（Limbal stem cells,LSCs）功能障碍或数量不足引起的一种病理现象,角膜上皮被结膜上皮细胞所取代,表现为角膜混浊且出现大量新生血管,视力下降甚至失明。药物治疗或常规手术治疗效果不理想。有研究报道采用含LSCs的角膜缘上皮细胞片自体移植（Autologous cultivated limbal epithelial transplantation,auto-CLET）技术可重建角膜上皮层,恢复角膜缘屏障功能,但在宠物犬的相关试验研究尚未见报道。本试验以无上皮层羊膜为载体,体外构建含LSCs的原代角膜上皮细胞植片,并对LSCD疾病模型犬进行auto-CLET手术治疗,以常规的羊膜移植术和结膜瓣遮盖术为对照组,术后进行眼表临床检查、角膜病理组织学和免疫组化染色观察,以评估其对LSCD疾病模型犬的治疗效果。1.含LSCs犬原代角膜缘上皮细胞植片的构建与鉴定本试验手术采集剖腹产犬胎儿羊膜,采用Dispase Ⅱ酶消化法制作无上皮层羊膜。手术采集3 mm2健康犬角膜缘组织,采用组织块培养法和Dispase Ⅱ酶消化法以无上层羊膜为载体体外培养犬原代角膜缘上皮细胞。根据细胞形态特征、超微结构特点、病理组织学和细胞标志物CK12、ABCG2和p63等进行角膜缘上皮细胞以及LSCs的鉴定。结果显示:Dispase Ⅱ酶消化后的羊膜表面无羊膜上皮细胞残留,暴露的基底膜由大量纵横交错的胶原纤维丝组成,胶原纤维丝完整,无受损或断裂。培养的原代角膜缘上皮细胞为多边形,扫描电镜可见细胞表面有大量微绒毛和微皱,细胞之间以及细胞与羊膜间连接紧密。犬原代角膜缘上皮细胞可在羊膜表面生长为2～3层,并表达角膜上皮细胞标志物CK12以及LSCs标志物ABCG2和p63,表明制作的原代角膜缘上皮细胞移植片含有LSCs,可用于后续的auto-CLET手术。2.含LSCs犬原代角膜缘上皮细胞片自体移植对LSCD疾病模型犬疗效的临床观察本试验选取15只健康比格犬,采用板层切除术建立LSCD疾病模型犬,造模后每7d对实验犬的术眼进行裂隙灯检查和印记细胞学检查,直至实验犬的术眼表面完全被纤维血管膜覆盖,印记细胞学检查角膜表面出现杯状细胞,确定弥漫性LSCD疾病模型犬造模成功。将LSCD疾病模型犬分为三组,分别实施auto-CLET手术、羊膜移植手术和结膜瓣遮盖手术。术后使用裂隙灯观察,对角膜的混浊度、新生血管和荧光素钠染色情况参照相关标准进行评分,并进行基础泪液分泌实验（Schirmer I test,SIT）、泪膜破裂时间（Tear film breakup Time,BUT）和印记细胞学检查（Impression Ctology,IC）评估术后是否存在干眼并发症。结果显示:造模术后35 d时,实验犬角膜表面完全被灰白色纤维血管膜覆盖,角膜混浊不透明,荧光素钠染色大面积着色,IC检查结果显示角膜表面出现杯状细胞,表明角膜上皮被结膜上皮取代,LSCD疾病模型犬造模成功。术后4个月时,auto-CLET组角膜透明度与正常角膜无差异,角膜缘界线清晰,无新生血管入侵,角膜表面荧光素钠点状着色。羊膜移植组和结膜瓣遮盖组角膜表面均存在大量新生血管,角膜混浊,荧光素钠着色。羊膜移植组和结膜瓣遮盖组角膜混浊度和新生血管评分均极显着高于auto-CLET组（p<0.01）,羊膜移植组角膜荧光素钠着色评分显着高于auto-CLET组和结膜瓣遮盖组（p<0.05）。根据治疗效果评估标准,auto-CLET组治疗成功率为77.78%,羊膜移植组和结膜瓣遮盖组均为0。三组术后BUT、SIT和IC结果均低于正常水平,且角膜表面荧光素钠着色,表明三组犬术后均存在干眼症。但auto-CLET组BUT与羊膜移植组和结膜瓣遮盖组相比极显着增加（p<0.01）,auto-CLET组IC等级极显着低于羊膜移植组和结膜瓣遮盖组（p<0.01）,表明auto-CLET组与羊膜移植组和结膜瓣遮盖组相比干眼症较轻。3.含LSCs犬原代角膜缘上皮细胞片自体移植后角膜组织学和免疫组化染色观察将LSCD疾病模型犬分为3组,分别于术前、术后第1、2和4个月采集术眼角膜样品。对采集的眼角膜进行病理组织学和免疫组化染色观察。结果显示:LSCD疾病模型犬角膜表面被结膜上皮覆盖,与基质层连接疏松,有大量新生血管和炎性细胞浸润,PAS染色可见杯状细胞。术后4个月时,auto-CLET组角膜上皮层由5～6层细胞组成,角膜各组成结构与正常角膜相似,角膜缘上皮基底细胞阳性表达p63和ABCG2。羊膜移植组和结膜瓣遮盖组角膜上皮层细胞排列杂乱,与基质层连接疏松,均有大量新生血管和炎性细胞浸润,角膜缘上皮基底细胞均不表达p63和ABCG2。上述试验结果表明,含LSCs的犬原代角膜缘上皮细胞移植片自体移植后成功在角膜表面成活,重建LSCD疾病模型犬角膜上皮层并恢复角膜缘屏障功能,术后角膜透明,无新生血管,成功率高达77.78%。
张红超[2]（2021）在《102例犬细菌性角膜溃疡的流行病学调查及手术对深层角膜溃疡的疗效观察》文中研究表明角膜溃疡（Cornea Ulceration）是兽医临床较常见的眼科疾病,其病原菌主要为伪中间葡萄球菌（Staphylococcus Pseudintermedius）。目前,治疗角膜溃疡的方法是药物治疗和药物治疗联合手术治疗,如联合带蒂板层角膜移植手术或带蒂结膜瓣遮盖术。但是,对这两种手术的临床疗效比较没有系统的研究。本研究首先对郑州地区102例角膜溃疡犬进行流行病学分析,然后依据流行病学调查情况,用主要致病菌构建犬角膜溃疡模型,进而观察带蒂板层角膜移植术和带蒂结膜瓣遮盖术对角膜溃疡的疗效。现将研究情况报告如下:试验一:102例犬角膜溃疡的流行病学调查及细菌的分离鉴定与耐药性分析收集2017年6月至2019年12月间郑州市三家宠物医院收治的102例犬角膜溃疡病例,统计其发病原因、年龄、性别、品种、治疗方法及预后等,并使用无菌生理盐水浸湿的细胞刷蘸取溃疡灶样品,对采集的样品进行细菌培养与纯化,然后使用MALDI Biotyper系统对分离的菌株进行鉴定。同时,将所分离的主要菌株做眼科常用药物的敏感性试验。试验结果如下:（1）发病率较高的品种为贵宾、比熊、京巴、柯基和混血犬;年龄从2月龄至19岁不等,平均年龄为5.8±0.54岁,发病原因主要以外伤（22例,21.57%）和干眼症（14例,13.73%）为主。（2）细菌培养阳性99例,以伪中间葡萄球菌感染的混合感染病例为主;体外抑菌有效的抗生素有头孢甲肟（96.94%）、利福平（98.98%）、妥布霉素（97.96%）、左氧氟沙星（93.88%）和环丙沙星（96.94%）;而对四环素（91.84%）、红霉素（96.94%）和氯霉素（51.02%）有耐药性。试验二:不同治疗方法对伪中间葡萄球菌性犬角膜溃疡的疗效观察选用15只健康成年比格犬,使用微量注射器吸取伪中间葡萄球菌菌液注入角膜基质层内构建犬角膜溃疡模型。造模后48 h,使用0.5%聚维酮碘生理盐水溶液对溃疡灶进行冲洗。同时滴加氧氟沙星滴眼液和玻璃酸钠滴眼液12次/d,两种药物用药间隔为1 min。造模成功后,随机选择3只犬用于抗生素治疗组,12只犬用于抗生素联合手术治疗组,手术治疗组在术眼消毒后进行手术治疗,其中左眼行带蒂板层角膜移植术,右眼行带蒂结膜瓣遮盖术。并于术后7、14、21、28、35和42 d统计相关临床指标和信息。根据临床观察指标和症状进行评分。试验结果如下:（1）单纯抗生素治疗组实验犬在治疗后36-46h内均出现角膜穿孔,前房塌陷,虹膜脱出,羞明,流泪,眼分泌物增多;角膜大面积水肿、不透明,多象限内可见新生血管。单纯抗生素治疗组治疗无效。（2）手术治疗组角膜浑浊度评分:术前两组间无统计学差异（p>0.05）;术后7、14和21 d带蒂板层角膜移植组评分显着或极显着高于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01或p<0.05）;术后28d,两组间无统计学差异;术后35和42d,带蒂板层角膜移植组评分显着或极显着低于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01或p<0.05）。（3）手术治疗组角膜新生血管评分:术前及术后7d,两组间无统计学差异（p>0.05）;术后14、21、28和35d,带蒂板层角膜移植组评分显着或极显着高于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01或p<0.05）;术后42d,两组间无统计学差异（p>0.05）。（4）手术治疗组角膜水肿面积评分:术前两组间无统计学差异（p>0.05）;术后7和14 d,带蒂板层角膜移植组评分显着或极显着高于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01或p<0.05）;术后21、28、35和42d,两组间无统计学差异（p>0.05）。（5）手术治疗组泪液量检测结果:术前及术后2-6d,两组间无统计学差异（p>0.05）;术后8-18、32、38和42d,带蒂板层角膜移植组评分极显着低于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01）;在其余时间点,两组间无统计学差异（p>0.05）。（6）手术治疗组眼内压检测结果:术前及术后2-6d,两组间无统计学差异（p>0.05）;术后8-18、32、38和42 d,带蒂板层角膜移植组评分极显着低于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01）;在其余时间点,两组间无统计学差异（p>0.05）。试验三:不同治疗方法对伪中间葡萄球菌性角膜溃疡犬角膜组织病理学及相关细胞因子表达的影响将抗生素联合手术治疗组的12只实验犬随机分成四组,分别于术后14、28、35和42 d进行手术采取角膜。将采集的角膜沿手术位置一分为二,一半用于组织切片制作,一半用于荧光定量检测细胞因子。试验结果如下:（1）单纯抗生素治疗组的组织病理学变化:角膜上皮层缺失,结构不完整,内皮细胞层部分区域缺失,后弹力层缺失。溃疡灶内可见新生肉芽组织,但无法完全闭合溃疡灶。（2）手术治疗组的组织病理学变化:带蒂板层角膜移植组角膜结构完整,角膜上皮层重新上皮化,纤维蛋白排列整齐有序,后弹力层和内皮层结构完整。带蒂结膜瓣遮盖组溃疡灶处完全覆盖结膜上皮,细胞密度高,排列杂乱无章,基质层可见新生血管,纤维蛋白排列无序。后弹力层和内皮层结构完整。（3）炎性因子基因表达的变化:术后14和28 d,与带蒂结膜瓣遮盖组相比,带蒂板层角膜移植组中TLR2、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA相对表达量极显着升高（p<0.01）;术后35d,与带蒂结膜瓣遮盖组相比,带蒂板层角膜移植组中TLR2和TNF-α的mRNA相对表达量极显着升高（p<0.01）,其余炎性因子基因表达量在两组间无统计学差异（p>0.05）;术后42d,两组各炎性因子基因表达量无统计学差异（p>0.05）。（4）生长因子基因表达的变化:术后14 d,与带蒂结膜瓣遮盖组相比,带蒂板层角膜移植组中VEGF、FGF和TGF的mRNA相对表达量均显着或极显着升高（p<0.05或p<0.01）。术后28d,两组各细胞因子的mRNA相对表达量无统计学差异（p>0.05）。术后35和42 d,与带蒂结膜瓣遮盖组相比,带蒂板层角膜移植组中TGF的mRNA相对表达量显着降低（p<0.05）,其余生长因子的mRNA相对表达量无统计学差异（p>0.05）。试验四:带蒂板层角膜移植术对犬深层角膜溃疡临床病例的疗效观察对犬深层角膜溃疡临床病例采取带蒂板层角膜移植术后,连续观察至60 d。术后泪液量均在正常值范围内波动,眼内压在术后5-11 d内低于正常值范围,其余时间点均在正常值范围内。没有病例出现重复感染,术后恢复效果良好,视力均得到恢复。综上所述,郑州市102例犬角膜溃疡病例中的犬品种多为泰迪和短头颅犬,感染的细菌主要为伪中间葡萄球菌且对红霉素、氯霉素和四环素类药物耐药;板层角膜移植手术的术后恢复效果优于结膜瓣遮盖术,角膜愈合与透明度良好,纤维蛋白排列整齐有序,上皮层结构完整。
陈祖凤[3]（2020）在《维生素C对小鼠角膜碱烧伤修复作用的实验研究》文中研究指明目的:角膜碱烧伤损坏角膜组织结构,破坏角膜微环境,导致角膜缘干细胞功能障碍,延迟角膜损伤修复进程。本文旨在研究维生素C对小鼠角膜碱烧伤修复的促进作用,为临床治疗提供实验依据。方法:45只BALB/c小鼠,随机选择5只作为健康对照组,40只随机平均分为2组,制作右眼角膜碱烧伤模型,每组20只（20眼）:一组为实验组,碱烧伤1天后每日给予维生素C滴眼液（浓度为10%,每小时1次）联合腹腔内注射（50mg/kg,每日1次）处理,持续7天;另一组为对照组,给予无菌生理盐水（0.9%氯化钠溶液,每小时1次）局部滴眼,持续7天。于碱烧伤后第1、4、7、10天通过裂隙灯显微镜观察角膜上皮缺损程度、角膜混浊度及角膜新生血管情况,通过HE染色观察角膜病理组织学改变,免疫组织化学染色检测髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）、角膜缘干细胞标志物p63和PCNA（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、角膜上皮细胞标志物CK3（cytokeratin3,CK3）、肌成纤维细胞标志物α-SMA（α-smooth muscle actin,α-SMA）、角膜新生血管标志物CD31（platelet endothelial adhesion molecule,PECAM-1,CD31）的表达情况。结果:⒈碱烧伤后第1天小鼠角膜上皮损伤脱落,角膜荧光素染色阳性。碱烧伤后第10天,实验组小鼠角膜上皮完整,角膜上皮缺损评分明显低于对照组（0.80±0.20 vs 1.90±0.33,P=0.022）;同时,实验组角膜混浊程度明显改善,角膜混浊评分低于对照组（1.40±0.40 vs 3.00±0.44,P=0.029）。碱烧伤后对照组角膜周边新生血管形成,并逐渐向角膜中央长入,而实验组未见明显角膜新生血管形成,在第7天、第10天角膜新生血管评分低于对照组（第7天:1.00±0.32 vs 2.20±0.20,P=0.013;第10天:0.60±0.25 vs 1.80±0.20,P=0.005）。⒉角膜组织HE染色可见碱烧伤第1天中央角膜上皮缺损,第10天实验组角膜上皮完全修复;对照组角膜上皮仍有少许缺损。免疫组织化学染色显示,碱烧伤后第4、7和10天实验组每视野下（×400倍）p63阳性细胞数分别为（均数±标准差）:16.33±0.88、19.67±1.45、28.67±1.86,对照组分别为:10.33±0.88、13.00±1.16、14±1.16,实验组p63阳性细胞数明显高于对照组（第4天P=0.010、第7天P=0.023、第10天P=0.003）。碱烧伤后第4、7和10天实验组每视野下（×400倍）PCNA阳性细胞数分别为（均数±标准差）:17.33±1.20、21.33±1.20、33.33±2.60,对照组为:9.00±1.16、14.33±1.45、19.00±1.53,实验组PCNA阳性细胞数明显高于对照组（第4天P=0.008、第7天P=0.021、第10天P=0.009）。碱烧伤后第10天,实验组免疫组织化学染色CK3的平均光密度值为0.1001±0.0075;对照组为0.0512±0.0070,实验组明显高于对照组（P=0.009）。⒊碱烧伤后第4天、7天和10天,实验组角膜碱烧伤区域炎性细胞的浸润较少,中央角膜MPO的平均光密度值均显着低于对照组(第4天:1.40×10-4±6.32×10-5 vs 4.90×10-4±8.14×10-5,P=0.027;第7天:4.09×10-5±1.97×10-5 vs2.33×10-4±4.57×10-5,P=0.018;第10天:6.20×10-6±3.64×10-6 vs 5.69×10-5±9.79×10-6,P=0.008)。⒋碱烧伤后第7、10天实验组角膜CD31阳性新生血管数量少于对照组（第7天:4.67±0.89 vs 12.33±0.89,P=0.004;第10天:6.33±1.45 vs 16.33±0.88,P=0.004）,且在第10天,实验组α-SMA的平均光密度值显着低于对照组(1.55×10-4±3.47×10-5 vs 3.76×10-4±4.54×10-5,P=0.018)。结论:维生素C可促进碱烧伤后角膜上皮修复,减少角膜新生血管的形成,减轻角膜混浊程度,抑制碱烧伤后角膜的炎症反应,为维生素C在角膜碱烧伤的治疗中提供实验依据。
徐佩芳[4]（2020）在《眼睑缺损修复中组织工程睑板替代材料的应用研究》文中进行了进一步梳理第一部分新型支化聚乙烯多孔支架材料的制备及其生物相容性评估目的利用新型支化聚乙烯弹性体作为材料本体构建可用于软组织修复的组织工程多孔支架。探索制备聚乙烯多孔支架的可行性,获得具有合适孔隙率,孔连通性及孔径大小的支架。观察材料本体及多孔支架的理化特征,评估材料体外及体内生物相容性。以期构建出具有良好生物相容性,能快速被组织整合的多孔支架材料,为后续作为睑板替代材料提供可能。方法选用明胶粒子作为致孔剂制备支化聚乙烯支架。扫描电镜观察本体材料及支架的微观结构,排乙醇法测定支架孔隙率。浸提液法检测材料对NIH/3T3成纤维细胞和人静脉内皮细胞的毒性,FDA活细胞染色观察细胞在材料表面黏附与增殖,共聚焦显微镜观察三维培养下人静脉内皮细胞在支架上的细胞行为。大鼠背部皮下植入支架,通过组织学及分子生物学以评估材料体内宿主组织反应。结果支化聚乙烯弹性体结构疏松,表面疏水。以孔径280-480?m的明胶颗粒为模板可以制备结构稳定,孔隙率可达90%,且孔连通性良好的多孔支架。CCK-8试验检测支化聚乙烯浸提液对NIH/3T3成纤维和人静脉内皮细胞毒性,各时间点细胞增殖与空白对照无显着差异（P>0.05）。人静脉内皮细胞在材料表面黏附与增殖优于NIH/3T3成纤维细胞。人静脉内皮细胞在支架上三维培养7天后,支架被完全内皮细胞化。植入大鼠背部后,支架只引起短暂且轻微的炎症反应,快速的血管化,以及适量的胶原沉积。分子生物学结果显示炎症因子表达处于较低水平,而血管化和胶原沉积相关基因表达上调,与组织学结果基本一致。结论支化聚乙烯弹性体具有良好的可加工性和成膜性能。明胶模板致孔剂法可适用于制备孔隙率高,孔径适度,孔连通性良好的多孔支架。浸提液实验及细胞直接接触实验提示材料在体外没有明显细胞毒性。多孔支架体内植入后引起轻微的炎症反应,并能被快速的纤维血管化,材料与宿主组织整合良好。第二部分新型支化聚乙烯睑板材料应用于眼睑损伤修复的研究目的评估天然睑板及支化聚乙烯多孔支架的力学性能及微纳结构。分析评价其作为睑板替代材料在原位植入兔眼睑缺损中的修复效果,为支化聚乙烯支架材料在组织工程中的应用提供新的思路和实验基础。方法获取兔新鲜睑板组织,观察其力学性能,组织学组成及生物学功能。分析支化聚乙烯支架和Medpor对照材料的力学性能和微纳结构,评估其与天然睑板的性能及结构仿生可行性。建立兔睑板缺损动物模型,原位植入支化聚乙烯支架及Medpor材料,通过病理组织切片H&E和Masson染色观察炎症反应,支架位置,组织整合等情况,综合评估材料与眼睑组织的相互作用。结果兔睑板由致密纤维结缔组织包裹规律排列的睑板腺组成,平均拉伸模量为0.92±0.1 MPa,断裂伸长率为50.8±10.4%。支化聚乙烯支架及Medpor植片的弹性模量及断裂伸长率为分别0.8±0.1MPa,76.2±2.8%,和30.2±4.5Mpa,7.0±1.1%。成功构建兔睑板缺损模型,术后4周,如果没有进行睑板重建,睑板表现为疤痕收缩,形成眼睑切迹。植入支化聚乙烯支架组修复效果优于Medpor植入组。经H&E染色可见,支化聚乙烯支架内部被纤维血管组织整合,材料位置稳定,而Medpor内部组织浸润不足,部分出现移位及暴露。Masson染色结果显示,支化聚乙烯支架和Medpor支架引起的纤维包裹厚度为134.4±24.9?m和271.6±46.5?m。结论支化聚乙烯多孔支架具有与天然睑板相似的力学性能,相比于Medpor材料在植入眼睑后能更快速被纤维血管化,与宿主整合,具有更好的稳定性,且材料刚度与组织相近,可以支持和适应眼睑形态。本研究尝试构建结构和力学性能与组织匹配的替代材料,为眼睑重建提供了新的材料来源和思路。第三部分仿睑板-结膜双层复合支架的制备及其对眼睑损伤修复的研究目的基于睑板-结膜组织的组成及结构,探索构建可以同时重建睑板和结膜组织的双层复合材料。微观层面分析双层支架材料对细胞行为的影响,进一步原位评估该材料对眼睑后层缺损修复效果。方法通过将软材料胶原/壳聚糖（Col/CS）复合至硬材料聚富马酸丙二醇酯/甲基丙烯酸羟乙酯（PPF-HEMA）获得双层复合支架。扫描电镜观察支架形态及孔结构,排乙醇法测量支架孔隙率,通用力学试验机测试材料的压缩及拉伸性能,根据支架在磷酸盐缓冲液中的质量损失分析体外降解性能。观察人结膜上皮细胞（Cj ECs）在支架中的细胞黏附,增殖活性,迁移行为等。构建兔眼睑后层缺损模型,原位植入评估双层支架的修复效果。结果成功构建了PPF-COL双层复合支架,韧性的PPF-HEMA支架做为骨架材料,支撑柔性Col/CS内衬,模拟眼睑后层睑板-结膜双层结构。双层支架具有高孔隙率,约90%,表层Col/CS及底层PPF-HEMA孔径分别约为95?m和235?m,体外降解稳定,降解12周时,原有宏观及微观结构保持良好。Cj ECs细胞在双层支架中增殖明显高于单纯PPF-HEMA支架,且趋向于向Col/CS表面迁移,汇合。在眼睑重建模型中,复合一定厚度的Col/CS的双层支架可以明显促进结膜缺损闭合,再上皮化,再生组织中结膜上皮特异性染色CK4和MUC5AC阳性。结论Col/CS与PPF-HEMA骨架复合后,双层支架在体外表现出更好的细胞黏附和增殖能力。在兔眼睑后层缺损修复中,具有较好的重建效果,同时支持功能性结膜组织再生。本研究结果为组织工程眼睑缺损重建的理想替代物的设计和构建提供了新的概念。
叶国宁,田朋飞,张敏,杨苏云[5]（2018）在《羊膜移植联合自体角膜缘干细胞移植治疗眼部烧伤》文中认为目的:探究羊膜移植联合自体角膜缘干细胞移植治疗对眼部烧伤患者眼表修复时间、修复率及并发症的影响。方法:回顾性分析我院行自体角膜缘干细胞移植治疗（对照组）和行羊膜移植联合自体角膜缘干细胞移植治疗（观察组）的各61例61眼眼部烧伤患者临床资料。记录两组术后眼表修复率、修复时间、术后12wk视力情况及并发症发生情况（睑球粘连、角膜新生血管、角膜溶解溃疡）,并比较两组术前及术后2wk细胞因子[血管内皮生长因子（VEGF）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）]水平差异。结果:观察组术后眼表修复率高于对照组（P<0.05）,且修复时间低于对照组（P<0.05）。术后12wk时,观察组视力情况明显优于对照组（P<0.05）。观察组术后并发症总发生率明显低于对照组（P<0.05）。术后2wk时,两组血清VEGF、TGF-β1、IGF-1水平均较术前升高（P<0.05）,且对照组高于观察组（P<0.05）。结论:羊膜移植联合自体角膜缘干细胞移植对眼部烧伤患者治疗效果显着,可促进患者眼表修复,改善术后视力,调节患者角膜血管新生情况,降低术后并发症风险。
郭庆[6]（2017）在《羊膜对角膜损伤的治疗作用及其机理研究》文中进行了进一步梳理眼表疾病是眼科的常见病、多发病,且复发率高,是眼科主要致盲疾病之一。对于各种眼表疾病所致角膜上皮缺损的治疗,目前以眼表面重建术效果最好,常采用的方法是自体或异体角膜移植术。但自体角膜缘取材有限,并有造成健眼角膜缘干细胞缺乏的风险。异体角膜要求新鲜,且存在来源不足、排斥反应等问题。由于羊膜有其特有的结构特点和促进组织修复的生物学特性,研究者们开始转向以羊膜为原材料治疗眼表疾病的研究中。在对羊膜移植的研究基础上,羊膜的研磨提取液—羊膜匀浆液保留了羊膜中的有效生物成分,在治疗眼表疾病方面取得了一定的进展,是一种较新的尝试。随着生物技术和其他相关技术的发展,以羊膜上皮细胞作为“种子细胞”构建组织工程角膜上皮,在眼表疾病治疗中亦显示出良好的发展前景。本文以羊膜为原材料,从动物实验、临床研究、细胞培养三个层面,研究羊膜移植片、羊膜匀浆液、羊膜上皮细胞对角膜上皮缺损的治疗作用及作用机制,为解决眼表重建材料缺乏及严重眼表疾病的治疗提供新的方法和新的理论依据。首先建立兔角膜上皮损伤的动物模型,行以羊膜移植术,以观察羊膜对动物角膜伤口愈合的作用。结果发现,羊膜移植组与对照组比较,角膜上皮愈合加快,显微形态学观察显示,实验组细胞排列水平、细胞形态、炎症细胞数等方面较对照组均明显改善。其次,在动物实验的基础上,对不同病因所致的眼表上皮缺损患者24人（25眼）,行以羊膜移植术,该临床研究发现:25只眼中21只眼眼表面得以重建,视力有不同程度的提高。再生的角膜上皮透明,结膜组织稳定、无感染。平均观察28.3周,所有21只眼无复发,另外3只眼因并发症致手术失败。再次,以上皮细胞缺损的兔角膜作为研究对象,观察不同浓度羊膜匀浆液对角膜上皮细胞增殖的作用。结果发现,羊膜匀浆液对兔角膜上皮细胞增殖和修复具有明显的促进作用,且这种促进作用在一定范围内随浓度增加而增强,即角膜上皮细胞的增殖率对羊膜匀浆液具有浓度依从性。羊膜匀浆组与羊膜移植组比较作用效果相同,但可避免手术并发症。最后,进行羊膜及角膜上皮细胞培养以及二者共同培养的细胞学研究。结果显示:羊膜上皮细胞在原代培养2 h后开始贴壁生长。细胞呈多角形、不规则形,排列呈铺路石样。体外可连续传45代,CK3、CK18、CK19呈阳性表达。流式细胞仪检测CK3、CK18、CK19表达率分别为40.84±3%,47.51±2%和32.41±3%。角膜上皮细胞在培养的第3天时开始爬出,呈多角形,排列均匀。经诱导培养后的羊膜上皮细胞呈多角形、扁平状,细胞体积增大。流式细胞学检测CK3表达率为76.40±0.3%,与诱导前相比有显着差异（P<0.05）,具有统计学意义。综上所述,本文针对羊膜进行了动物实验、临床研究、细胞培养三个层面的研究工作,实验和临床研究均证明了羊膜对角膜上皮缺损的修复具有促进作用,为解决眼表重建材料缺乏及严重眼表疾病的治疗提供了新的途径和方法。
李燕伟[7]（2013）在《人羊膜间充质干细胞移植对兔角膜碱烧伤的疗效及磁标记示踪分析》文中提出背景和目的角膜碱烧伤后,碱性物质能够迅速渗透眼表面,通过细胞渗透、蛋白水解酶和细胞因子的分泌导致严重的特征性的炎症反应。为保护角膜上皮的完整性,阻止基质层溃疡发生,国内外学者们已经应用了多种治疗方法,均取得了一定的疗效,但是何为最佳疗法,至今仍有争议,并未确定。本研究分别通过四个阶段探讨磁标记人羊膜间充质干细胞（human amniotic membrane-derived mesenchymal stem cells, hAM-dMSCs）移植对兔角膜碱烧伤治疗的影响,以及碱烧伤后泪液乳铁蛋白（lactoferrin, LF）的表达,研究泪液LF与碱烧伤的关系及其意义,以期获得对于角膜急性碱烧伤较为简易且适于临床使用的最佳治疗方法。1.通过观察人羊膜组织来源的细胞形态学、流式细胞仪检测和MTT法活性细胞检测等鉴定原代获取的间充质干细胞,为后续的实验提供干细胞。2.不同方法标记原代培养的羊膜间充质干细胞,探索最合适的细胞标记方法。3.超顺磁性氧化铁纳米颗粒（Superparamagnetic iron oxide nanoparticles, SPIONs）标记的hAM-dMSCs局部移植入角膜碱烧伤眼结膜下,观察细胞在宿主存活和迁徙情况；联合传统的羊膜移植,通过临床检查及检测IL-1p和TNF-α评估治疗效果,探讨干细胞在角膜碱烧伤后组织再生中扮演的角色。4.采集正常和碱烧伤治疗后的兔泪液,采用放射免疫分析方法,分别测定其中LF的含量,研究泪液LF与碱烧伤的关系及其对碱烧伤愈合的意义。材料和方法1羊膜间充质干细胞的原代培养和鉴定使用酶消化和贴壁筛选法获取人羊膜组织中的间充质干细胞,反复传代对其扩增和纯化细胞。通过观察细胞学形态、MTT法活性检测和流式细胞仪检测等鉴定人羊膜来源的间充质干细胞。通过显微镜观察细胞的形态变化；采用流式细胞术检测人羊膜来源的细胞膜表面特异性蛋白分子CD31、CD44、CD45、 CD90、CD29、CD34的表达。2.SPIONs标记的羊膜间充质干细胞在体外的活性监测本研究应用SPIONs标记的细胞生长培养基（Cytokine Growth Medium, CGM）,标记浓度分别为3.5、7、14和28μg/ml,细胞标记采用单次SPIONs标记法。培养的细胞分别于标记后第1、2、4和7d收获,各时间点获得的细胞分为五组,分别行MTT法、普鲁氏蓝染色和流式细胞仪检测；无SPIONs标记的细胞生长培养基组作为对照组。3.羊膜间充质干细胞的标记分别采用不同浓度的Brdu、DAPI和SPIONs标记原代培养的人羊膜间充质干细胞,确定较好的羊膜间充质干细胞标记途径和方法,为羊膜间充质干细胞移植治疗角膜碱烧伤的活体示踪进行前期准备。4.羊膜间充质干细胞移植对重度角膜碱烧伤的疗效待移植细胞的制备：应用浓度为14μg/ml SPIONs标记原代培养获取的羊膜间充质干细胞,标记时间24h,收集细胞制成1×106细胞混悬液备用。实验动物分组和细胞移植的方法：动物被随机分成四组,对照组（n=10）；人羊膜间充质干细胞注射组（干细胞注射组,n=12）：结膜下注射含标记后的hAM-dMSCs注射液；单纯羊膜移植组（羊膜组,n=12）：行单纯羊膜移植；人羊膜间充质干细胞联合羊膜移植组（联合组,n=12）：结膜下注射含标记后的羊膜间充质干细胞注射液联合羊膜移植。结膜下注射一律选择眼球结膜颞上部位,注射量100微升,约含1×106个羊膜间充质干细胞,干细胞注射组和联合组对侧眼分别注射同等量含14μg/ml SPIONs的生理盐水作为对照。羊膜移植方法：碱烧伤后,实验侧眼开睑器开睑,1：1000庆大霉素液冲洗结膜囊,沿角膜缘环形剪开球结膜,分离结膜下组织,刮除角膜表面坏死组织,将羊膜上皮面朝上平铺使覆盖整个角膜和角膜缘,用10.0尼龙线于角膜缘附近间断缝合,并固定在浅层巩膜上,将球结膜游离缘固定在羊膜上,剪去多余羊膜组织。术毕结膜下注射庆大霉素2万u+地塞米松2mg,结膜囊内涂红霉素眼膏,缝合睑缘防止兔损伤手术创面。术后局部常规点抗生素,激素。5.兔角膜碱烧伤后泪液乳铁蛋白的表达泪液乳铁蛋白（lactoferrin, LF）检测选择在角膜碱烧伤治愈后,停药2周进行。治疗方法采用本实验得出的最佳治疗方法：人羊膜间充质干细胞联合羊膜移植治疗碱烧伤。将30只大白兔随机分为三组：空白组（n=10）：不进行任何处理；对照组（n=10）：制作兔眼角膜碱烧伤模型,不进行间充质干细胞或羊膜移植；实验组（n=10）：造模后,局部结膜下行人羊膜间充质干细胞移植联合羊膜移植。造模动物均局部常规用药,停药2周开始实验检测。用微量吸管吸取结膜囊内的泪液80-100ul,置于0.5m1无菌静脉输液管中,管端加热封闭管口,置于深低温（-30℃）冰箱内保存待检。放射免疫分析方法,测定正常角膜和碱烧伤治愈后的兔泪液LF的含量。结果1.用胰酶和胶原酶消化羊膜组织,将获得的细胞悬液接种在细胞培养瓶内进行原代培养。24小时后,倒置相差显微镜下观察见少量细胞贴壁；培养48小时贴壁细胞数量略增多；72小时后,贴壁细胞数量显着增多；原代培养第7天,贴壁细胞接近50%-60%融合,或基本铺满培养瓶底,贴壁细胞呈成纤维细胞样细胞。流式细胞仪检测细胞分析显示：原代培养的第三代细胞,高表达膜表面蛋白分子CD29、CD44、CD90、CD105;阴性表达CD31、CD34、CD45和CD106。2.不同浓度的SPIONs进行标记羊膜间充质干细胞,普鲁氏蓝染色后显示：胞质内可见不同数量的蓝染颗粒,各组SPIONs标记细胞的标记率均为100%。随标记浓度增加,蓝染颗粒增加,铁颗粒呈簇状聚集分布成堆。MTT结果明确显示：SPIONs浓度小于和等于14μg/ml时,标记的羊膜间充质干细胞活性大于90%。当SPIONs浓度大于14μg/m1时,细胞胞质内蓝染颗粒聚集前后无变化。3.用3种标记液标记细胞后细胞数目明显减少,但SPIONs和DAPI标记组细胞数在3d以后开始增加,其中SPIONs组细胞生长较好,第6天达到高峰。Brdu标记组细胞数目始终维持在5×104左右。4.14μg/ml SPIONs标记的羊膜间充质干细胞移植入兔结膜下,4周后角膜切片行普鲁士蓝染色,角膜缘处可见大量的蓝染颗粒,说明hAM-dMSCs存活于角膜缘,生长良好。受体兔全身情况良好,眼局部无排斥反应发生。而注射含147μg/ml SPIONs的生理盐水的对侧眼,在注射4周后未见蓝染颗粒。5.角膜碱烧伤的hAM-dMSCs移植结果：与对照组比较,实验组愈合率显着高于对照组（P<0.01）,而三个实验组的愈合率差异无显着性（X2=1.2,P>0.05）。4周时各实验组之间角膜新生血管与对照组相比差异有显着性（P<0.05）；角膜混浊度评分实验组与对照组相比差异有显着性（P<0.01）,；干细胞注射组和羊膜组与联合组相比差异有显着性（P<0.01）,干细胞注射组与羊膜组角膜混浊度评分差异无显着性（t=0.374,P>0.05）；不同治疗方法和时间角膜新生血管面积各组与对照组相比差异有显着性（P<0.01或P<0.05）,实验组组间比较,联合组与其余两个实验组相比差异有显着性（P<0.05）。HE染色显示角膜上皮层有3-4层细胞,由少量表皮细胞、翼状细胞和部分基底细胞组成。基质层可见少量新生血管和炎性细胞。角膜普鲁士染色显示,角膜缘处可见蓝染颗粒,提示hAM-dMSCs仍存活于角膜缘附近,角膜近中央区和中央区未见迁移的hAM-dMSCs。6.Western-blot检测兔角膜碱烧伤不同治疗方法后角膜TNF-a和IL-1β的表达：正常对照组及实验组角膜的蛋白经印记实验检测可见特异的阳性印迹带,Western-blot结果显示TNF-α和IL-1β在角膜碱烧伤后治疗过程中的各个阶段都有表达,且随着治疗时间的延长,其表达强度明显减弱。ELISA检测兔角膜碱烧伤后不同治疗方法和时间房水TNF-α和IL-1β的变化：实验眼房水TNF-α含量随着时间的延长呈下降趋势,不同时间点之间房水TNF-α含量比较在统计学上有显着性差异。对照眼房水TNF-α含量平均值随着时间的延长亦呈下降趋势。在同一观察时间点,实验眼房水TNF-α含量均低于对照眼,在统计学上有显着性差异。实验组和对照组房水IL-1β含量平均值均随着时间的延长呈下降趋势,且实验组房水IL-1p含量均低于对照眼。在同一观察时间点,第1天和第3天,实验组房水IL-1p含量低于对照组,第7天和第14天联合组房水IL-1p含量低于对照眼,并且在统计学上均有显着性差异。7.实验组与对照组比较,各观察时间点泪液中乳铁蛋白浓度差异有显着性（P<0.01）；对照组和实验组各观察时间点泪液中相对乳铁蛋白浓度均无统计学差异（P>0.05）；与正常空白组相比,对照组各观察时间点泪液中乳铁蛋白浓度差异有显着性（P<0.05）,实验组与空白组相比,其浓度无统计学意义（P>0.05）。经Spearman相关分析,各时间点泪液乳铁蛋白的含量与Schirmer I试验呈正相关（P<0.01）。结论1.本实验从人羊膜中分离间充质干细胞,所得的间充质干细胞纯度较高。实验提示：贴壁筛选和反复传代是一种较为理想的提纯羊膜间充质干细胞的方法。2.局部结膜下注射移植]hAM-dMSCs治疗眼表化学伤安全可行,有助于临床上新建一种细胞来源广泛、无免疫排斥的、微创的治疗眼表创伤疾病的新手段。3.应用SPIONs标记方法标记羊膜间充质干细胞,SPIONs浓度小于和等于14μg/ml,既可使羊膜间充质干细胞得到标记,又不影响其活性。4.SPIONs标记hAM-dMSCs移植治疗角膜碱烧伤动物模型,可达到示踪的目的。5.早期局部结膜下行hAM-dMSCs移植可显着抑制伤侧角膜表面新生血管形成,加速重度角膜碱烧伤创伤修复。hAM-dMSCs在宿主的迁移和分化,与局部微环境的改变密切相关。hAM-dMSCs的作用机制可能是通过调节细胞生长因子的分泌,改善残留的正常细胞所处的微环境,促进残留细胞的生长来发挥修复作用。6.本研究在角膜碱烧伤早期行hAM-dMSCs移植,与对照组相比,测得泪液LF含量明显增高。因此,除进行紧急有效的抢救措施外,早期行hAM-dMSCs移植,不仅能够加快创伤角膜愈合,且能够提高患者治愈后的视觉质量及生活质量。
李保江,李霞,高晓唯,任兵[8]（2007）在《自体角膜缘干细胞分期移植治疗中重度眼部碱烧伤》文中进行了进一步梳理目的:观察分期人自体角膜缘干细胞移植治疗中重度眼部碱烧伤的临床效果。方法:对32眼中重度眼部碱烧伤早期进行自体角膜缘干细胞移植,随访观察2～18mo,如果未完全重建眼表面,可重复取角膜缘结膜组织（避开已手术区）,进行角膜缘干细胞Ⅱ期,Ⅲ期移植。结果:32眼中,31眼眼表重建成功,29眼角膜透明,3眼角膜半透明,3眼发生轻度睑球粘连。结论:自体角膜缘干细胞移植治疗中重度眼部碱烧伤。对于重建眼表面,提高视功能,早期分期移植应用疗效较好。
张峰伟,黄道平,林亚琴[9]（2007）在《新鲜人羊膜移植联合自体角膜缘干细胞移植治疗严重热、化学伤眼病》文中研究说明目的探讨新鲜人羊膜移植联合自体角膜缘干细胞移植治疗严重热、化学伤眼病的疗效。方法50例单眼严重热、化学伤眼病患者,随机分成2组。对照组24例24眼,采用ATP、Co-A、维生素C、四环素及地塞米松治疗;治疗组26例26眼,在给予对照组相同治疗2周后行新鲜人羊膜移植联合自体角膜缘干细胞移植术。均随访18个月,观察两组的视力、上皮愈合时间、新生血管浸润、角膜穿孔及睑球粘连等情况。结果上皮愈合时间对照组为24.6±4.4d,治疗组为16.4±4.4d,差异有非常显着意义（P<0.01）;发生睑球粘和角膜穿孔治疗组均少于对照组（P<0.005）。在治疗组中,上皮愈合时间Ⅲ度烧伤为14.2±2.3d,Ⅳ度烧伤为20.5±3.4d,差异有非常显着意义（P<0.01）。结论新鲜人羊膜移植联合自体角膜缘干细胞移植治疗严重热、化学伤眼病,具有病程短,睑球粘连少,及防止角膜穿孔的作用。
宫玉波,陆晓和,张永强,袁伟,彭小娟[10]（2005）在《新鲜羊膜与自体角膜缘上皮移植对急性眼化学烧伤的修复》文中指出目的:观察新鲜羊膜与自体角膜缘上皮移植对急性眼化学烧伤的修复作用,为临床急性眼化学烧伤的视功能恢复探索更为有效的方法。方法:2001-01/2002-08南方医科大学珠江医院眼科收治急性眼化学烧伤患者12例12眼,于伤后1～5d行自体角膜缘上皮移植联合新鲜人羊膜移植重建眼表,随访观察羊膜植片情况、眼表上皮化时间和视力恢复情况。结果:随访6～12个月,12例12眼眼表面重建成功,未见新鲜羊膜植片急性排斥反应,及感染发生;无新生血管、假性胬肉及角膜上皮缺损。7眼角膜透明,3眼角膜云翳,1眼角膜斑翳,1眼角膜白斑,视力均不同程度的提高,11眼脱盲。结论:新鲜人羊膜移植联合自体角膜缘上皮移植是修复急性眼化学烧伤的一种有效方法。
二、人羊膜联合自体角膜缘移植治疗严重眼部烧伤的观察及护理（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人羊膜联合自体角膜缘移植治疗严重眼部烧伤的观察及护理（论文提纲范文）
（1）含LSCs的原代角膜缘上皮细胞片自体移植对犬大面积角膜损伤的疗效研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 角膜缘干细胞研究进展 |
| 1 角膜缘解剖结构 |
| 2 角膜缘干细胞概述 |
| 3 角膜缘干细胞的培养 |
| 3.1 培养方法 |
| 3.2 培养基的选择 |
| 3.3 饲养层细胞 |
| 3.4 培养载体 |
| 3.5 气液交界面培养 |
| 4 角膜缘干细胞的标志物 |
| 4.1 ΔNp63α |
| 4.2 C/EBPδ和Bmil |
| 4.3 ABCG2和Noch-1 |
| 4.4 细胞角蛋白 |
| 第二章 角膜缘干细胞缺乏症的研究进展 |
| 1 角膜缘干细胞缺乏症的病因 |
| 2 角膜缘干细胞缺乏症的临床表现 |
| 3 角膜缘干细胞缺乏症的诊断方法 |
| 3.1 临床表现及裂隙灯检查 |
| 3.2 印迹细胞学检查 |
| 3.3 活体成像技术 |
| 4 角膜缘干细胞缺乏症治疗的研究进展 |
| 4.1 CLET |
| 4.2 CLAU |
| 4.3 SLET |
| 4.4 COMET |
| 5 试验目的与意义 |
| 参考文献 |
| 第二部分 试验研究 |
| 第一章 含LSCs犬原代角膜缘上皮细胞植片的构建与鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品和试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 主要试剂的配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 犬羊膜的采集、保存以及处理 |
| 2.2 犬LSCs的分离培养 |
| 2.3 犬原代角膜缘上皮细胞的超微结构观察 |
| 2.4 羊膜组织学观察 |
| 2.5 犬原代角膜缘上皮细胞相关基因表达的鉴定 |
| 2.6 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 羊膜去上皮层效果的鉴定 |
| 3.2 犬角膜缘上皮细胞的培养 |
| 3.3 犬原代角膜缘上皮细胞的超微结构 |
| 3.4 犬原代角膜缘上皮细胞相关基因的表达情况 |
| 4 讨论 |
| 第二章 含LSCs犬原代角膜缘上皮细胞片自体移植对LSCD疾病模型犬疗效的临床观察 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品和试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 LSCD疾病模型犬的制作 |
| 2.2 手术治疗 |
| 2.3 术后护理 |
| 2.4 裂隙灯检查 |
| 2.5 眼表临床检查 |
| 2.6 数据分析 |
| 3.1 临床表现 |
| 3.2 裂隙灯检查结果 |
| 3.3 角膜临床评分结果 |
| 3.4 眼表临床检查结果 |
| 3.5 印记细胞学检查结果 |
| 4 讨论 |
| 第三章 含LSCs犬原代角膜缘上皮细胞片自体移植对角膜的组织结构及相关因子的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 试剂配制 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 实验动物的分组 |
| 2.2 术前准备、麻醉、保定与消毒 |
| 2.3 手术采样 |
| 2.4 角膜组织学观察 |
| 2.5 免疫组化染色法检测ABCG2和p63的表达 |
| 2.6 qPCR检测IL-1β、VEGF和FGF的表达水平 |
| 2.7 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 角膜组织学观察结果 |
| 3.2 免疫组化染色观察术后角膜中ABCG2和p63的表达情况 |
| 3.3 手术治疗后角膜中细胞因子的mRNA相对表达量变化 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（2）102例犬细菌性角膜溃疡的流行病学调查及手术对深层角膜溃疡的疗效观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 角膜溃疡的病因和愈合机制 |
| 1 角膜溃疡的病因与致病机制 |
| 1.1 角膜溃疡的病因 |
| 1.2 角膜溃疡的致病机制 |
| 2 角膜上皮层伤口的愈合机制 |
| 2.1 生长因子/细胞因子在上皮创面愈合中的作用 |
| 2.2 Toll样受体2 |
| 2.3 蛋白酶在上皮创面愈合中的作用 |
| 2.4 细胞外基质(ECM)在上皮创面愈合中的作用 |
| 3 角膜基质伤口的愈合机制 |
| 3.1 愈合过程中角膜细胞向成纤维细胞和肌成纤维细胞转化 |
| 3.2 免疫系统细胞在基质修复中的作用 |
| 3.3 创面愈合过程中基质细胞外基质的改建 |
| 3.4 与基质创面愈合过程相关的信号通路 |
| 第二章 治疗角膜溃疡方法的研究进展 |
| 1 药物治疗 |
| 2 角膜工程生物材料 |
| 2.1 胶原蛋白 |
| 2.2 丝素蛋白 |
| 2.3 明胶 |
| 2.4 脱细胞角膜 |
| 2.5 壳聚糖 |
| 2.6 其他合成聚合物水凝胶 |
| 3 手术治疗 |
| 3.1 角膜溃疡清创术 |
| 3.2 结膜瓣遮盖术 |
| 3.3 羊膜移植术 |
| 3.4 穿透角膜移植术 |
| 3.5 板层角膜移植术 |
| 4 本研究的目的与意义 |
| 参考文献 |
| 第二部分 试验研究 |
| 第一章 102例犬角膜溃疡的流行病学调查及细菌分离鉴定与药敏试验 |
| 1 材料 |
| 1.1 临床病例 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 常用试剂配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 样品采集 |
| 2.2 细菌的分离和纯化培养 |
| 2.3 MALDI Biotyper系统鉴定细菌和细菌保存 |
| 2.4 药物敏感性试验 |
| 3 结果 |
| 3.1 病因 |
| 3.2 发病率 |
| 3.3 品种 |
| 3.4 性别和年龄 |
| 3.5 治疗方法 |
| 3.6 治疗效果 |
| 3.7 细菌学分类 |
| 3.8 药物敏感性试验 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 不同治疗方法对犬伪中间葡萄球菌性角膜溃疡的疗效观察 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品和试剂 |
| 1.3 试剂配制 |
| 1.4 仪器和设备 |
| 1.5 手术器械 |
| 2 方法 |
| 2.1 造模前准备 |
| 2.2 麻醉与保定 |
| 2.3 术部消毒 |
| 2.4 角膜溃疡模型建立 |
| 2.5 手术治疗前准备 |
| 2.6 抗生素治疗组 |
| 2.7 抗生素联合手术治疗组 |
| 2.8 术后护理 |
| 3 术后临床常规检查及裂隙灯观察 |
| 3.1 临床检查 |
| 3.2 裂隙灯检查 |
| 3.3 治疗过程中犬泪液量检测 |
| 3.4 犬眼内压测定 |
| 4 统计分析 |
| 5 结果 |
| 5.1 抗生素治疗组裂隙灯观察的变化 |
| 5.2 手术治疗组裂隙灯观察 |
| 5.3 临床评分 |
| 5.4 泪液量检测结果 |
| 5.5 眼内压检测结果 |
| 5.6 三种治疗方案的疗效 |
| 5.7 三种治疗方案的愈合时间 |
| 6 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 不同治疗方法对角膜溃疡模型犬角膜组织病理学与相关细胞因子表达的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 试剂配制 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 实验犬术前准备 |
| 2.3 手术采样 |
| 2.4 组织切片制作 |
| 2.5 荧光定量PCR检测相关基因表达量 |
| 2.6 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 组织病理学观察 |
| 3.1.1 抗生素治疗组组织病理学观察 |
| 3.1.2 抗生素联合手术治疗组病理学切片观察 |
| 3.2 qPCR检测角膜细胞因子的结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 带蒂板层角膜移植术对犬深层角膜溃疡临床病例的疗效观察 |
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 临床病例介绍 |
| 2 方法 |
| 2.1 术前临床检查 |
| 2.2 手术方法 |
| 2.3 术后护理 |
| 2.4 术后临床检查 |
| 3 结果 |
| 3.1 术前检查结果 |
| 3.2 术后检查结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 附录 |
（3）维生素C对小鼠角膜碱烧伤修复作用的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验主要试剂 |
| 1.1.3 实验仪器、设备 |
| 1.1.4 主要试剂配制 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 小鼠角膜碱烧伤模型的制作 |
| 1.2.2 实验分组 |
| 1.2.3 治疗方法 |
| 1.3 碱烧伤后眼前段观察 |
| 1.3.1 角膜上皮损伤测定 |
| 1.3.2 角膜新生血管情况 |
| 1.3.3 角膜混浊情况 |
| 1.4 组织病理学观察 |
| 1.4.1 苏木精-伊红染色(HE染色) |
| 1.4.2 免疫组织化学染色 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 维生素C可促进角膜碱烧伤后角膜上皮愈合 |
| 2.2 维生素C抑制碱烧伤后角膜新生血管的生成 |
| 2.3 维生素C减轻碱烧伤后角膜混浊程度 |
| 2.4 维生素C促进碱烧伤后角膜缘干细胞增殖分化 |
| 2.5 维生素C能减轻碱烧伤后角膜的炎症反应 |
| 2.6 维生素C抑制碱烧伤后角膜基质CD31 和α-SMA的表达 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 综述 眼化学伤的临床治疗进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间撰写文章 |
| 致谢 |
（4）眼睑缺损修复中组织工程睑板替代材料的应用研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略词 |
| 绪论 |
| 1 眼睑缺损和重建 |
| 1.1 眼睑的生物学特征 |
| 1.2 眼睑缺损的手术重建 |
| 2 眼睑重建替代材料的选择 |
| 2.1 自体组织材料 |
| 2.2 异体/异种组织材料 |
| 2.3 人工合成材料 |
| 3 组织工程在眼睑重建中的应用 |
| 3.1 组织工程睑板替代材料性能要求 |
| 3.2 材料介导宿主免疫反应 |
| 4 总结 |
| 参考文献 |
| 第一部分 新型支化聚乙烯多孔支架材料的制备及其生物相容性评估 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 B-PE材料理化特征和形貌结构 |
| 3.2 B-PE多孔支架形貌和结构 |
| 3.3 细胞毒性 |
| 3.4 细胞黏附与增殖 |
| 3.5 B-PE支架表面内皮细胞化 |
| 3.6 B-PE支架体内生物相容性组织学评估 |
| 3.7 B-PE多孔支架背埋相关基因表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 新型支化聚乙烯睑板材料应用于眼睑损伤修复的研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 新鲜兔眼睑组织学与生物力学特征 |
| 3.2 B-PE多孔支架力学性能和微纳结构表征 |
| 3.3 兔睑板缺损修复大体观察 |
| 3.4 眼睑组织学修复效果评价 |
| 3.5 睑板缺损处纤维包裹评估 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 仿结膜-睑板双层复合支架的制备及其对眼睑损伤修复的研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 双层支架宏观及微观形貌 |
| 3.2 双层支架力学性能 |
| 3.3 双层支架体外降解 |
| 3.4 细胞在支架中的增殖实验 |
| 3.5 CjECs在支架中形态和分布 |
| 3.6 双层支架在睑板-结膜缺损重建中的作用 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 生物材料在眼表微环境重建中的应用 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在读期间所取得的科研成果 |
（5）羊膜移植联合自体角膜缘干细胞移植治疗眼部烧伤（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 对象和方法 |
| 1.1 对象 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 术前处理 |
| 1.2.2 术中处理 |
| 1.2.3 术后处理 |
| 1.2.4 观察指标 |
| 2 结果 |
| 2.1 两组术后眼表修复率及修复时间比较 |
| 2.2 两组术后视力情况比较 |
| 2.3 两组术后并发症发生情况比较 |
| 2.4 两组手术前后细胞因子水平比较 |
| 3 讨论 |
（6）羊膜对角膜损伤的治疗作用及其机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 课题来源 |
| 1.2 课题背景及研究的目的和意义 |
| 1.3 羊膜的特性 |
| 1.3.1 羊膜的组织学特性 |
| 1.3.2 羊膜的免疫学特性 |
| 1.3.3 羊膜的生物学特性 |
| 1.4 羊膜的研究现状及进展 |
| 1.4.1 羊膜的历史应用 |
| 1.4.2 羊膜的基础研究 |
| 1.5 羊膜在眼科的应用及研究进展 |
| 1.5.1 修复角膜上皮缺损 |
| 1.5.2 修复结膜上皮缺损及异常增生 |
| 1.5.3 治疗角巩膜溃疡及穿孔 |
| 1.5.4 角膜移植的辅助性治疗 |
| 1.5.5 眼部复杂化学烧伤的治疗 |
| 1.5.6 青光眼手术中的应用 |
| 1.5.7 屈光手术中的应用 |
| 1.5.8 其他眼病的治疗 |
| 1.6 羊膜在组织工程学中的应用 |
| 1.7 主要研究内容 |
| 第2章 实验材料及方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 羊膜植片的筛选 |
| 2.1.2 实验动物的筛选 |
| 2.1.3 临床治疗病人筛选 |
| 2.1.4 实验试剂 |
| 2.1.5 手术器械 |
| 2.1.6 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 羊膜植片的制备及保存 |
| 2.2.2 羊膜匀浆的制备及保存 |
| 2.2.3 羊膜匀浆蛋白含量测定及实验溶液制备 |
| 2.2.4 病理标本的取材制备 |
| 2.2.5 羊膜上皮细胞原代及传代培养 |
| 2.2.6 羊膜上皮细胞的检测 |
| 2.2.7 角膜上皮细胞原代培养 |
| 2.2.8 羊膜上皮细胞与角膜上皮细胞共同培养 |
| 2.2.9 诱导后羊膜上皮细胞检测 |
| 2.3 统计学方法 |
| 第3章 羊膜移植治疗兔角膜损伤的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验分组及动物模型的建立 |
| 3.2.1 实验分组 |
| 3.2.2 角膜损伤模型的建立 |
| 3.3 手术方式及观察指标 |
| 3.4 羊膜移植对兔角膜损伤愈合作用的比较分析 |
| 3.4.1 眼部炎症反应的比较分析 |
| 3.4.2 角膜上皮愈合时间的比较分析 |
| 3.5 羊膜移植术后显微形态学观察比较 |
| 3.5.1 光学显微镜观察比较 |
| 3.5.2 透射电镜观察比较 |
| 3.6 羊膜移植对角膜伤口愈合的影响 |
| 3.6.1 角膜伤口的愈合方式 |
| 3.6.2 生长因子、胶原纤维对角膜伤口愈合的影响 |
| 3.6.3 羊膜的作用及作用机理 |
| 3.6.4 实验结果及机理分析 |
| 3.7 本章小结 |
| 第4章 羊膜移植治疗人眼表疾病的临床研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 临床资料与手术方式 |
| 4.2.1 临床资料 |
| 4.2.2 羊膜植片的取材 |
| 4.2.3 手术方式 |
| 4.2.4 术后处理 |
| 4.3 临床愈后 |
| 4.4 典型病例报告 |
| 4.4.1 病例 1 |
| 4.4.2 病例 7 |
| 4.4.3 病例 19 |
| 4.5 羊膜移植的临床治疗作用及机理分析 |
| 4.5.1 临床愈后机理分析 |
| 4.5.2 手术适应症及手术方式的选择 |
| 4.5.3 术后并发症的预防和处理 |
| 4.5.4 影响愈后的相关因素分析 |
| 4.5.5 羊膜移植术临床应用的限制和不足 |
| 4.6 本章小结 |
| 第5章 羊膜匀浆液治疗兔角膜损伤的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 羊膜匀浆液对兔角膜上皮细胞增殖作用的研究 |
| 5.2.1 实验分组及动物模型制备 |
| 5.2.2 角膜裸区面积的观察测量及细胞增殖率测定 |
| 5.2.3 各组生长速度的比较 |
| 5.3 羊膜匀浆液与羊膜移植对兔角膜损伤修复作用的比较研究 |
| 5.3.1 实验分组及动物模型制备 |
| 5.3.2 角膜裸区面积的观察测量及细胞增殖率测定 |
| 5.3.3 各组生长速度的比较 |
| 5.4 羊膜匀浆液的作用机理及应用前景分析 |
| 5.4.1 羊膜匀浆液的作用及作用机理 |
| 5.4.2 实验结果及机理分析 |
| 5.4.3 羊膜匀浆液在眼科疾病中的应用 |
| 5.4.4 羊膜匀浆液的应用优势及前景 |
| 5.5 本章小结 |
| 第6章 羊膜上皮细胞体外培养及诱导分化研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 羊膜和角膜上皮细胞培养的形态变化及鉴定 |
| 6.2.1 羊膜上皮细胞形态变化 |
| 6.2.2 羊膜上皮细胞的鉴定 |
| 6.2.3 角膜上皮细胞的形态变化 |
| 6.2.4 角膜细胞诱导的羊膜上皮细胞形态变化及鉴定 |
| 6.3 羊膜和角膜上皮细胞培养的相关因素分析 |
| 6.3.1 实验材料选择相关性分析 |
| 6.3.2 羊膜上皮细胞的培养分析 |
| 6.3.3 羊膜上皮细胞的鉴定分析 |
| 6.3.4 角膜上皮细胞的培养分析 |
| 6.3.5 羊膜上皮细胞的诱导分化分析 |
| 6.3.6 本章实验的不足 |
| 6.4 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文及其他成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）人羊膜间充质干细胞移植对兔角膜碱烧伤的疗效及磁标记示踪分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 第一部分：羊膜间充质干细胞的分离、纯化和鉴定 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 5 参考文献 |
| 6 附图 |
| 第二部分：羊膜间充质干细胞的标记方法 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 5 参考文献 |
| 6 附图 |
| 第三部分： 羊膜间充质干细胞移植对重度兔角膜碱烧伤的疗效及示踪分析 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 5 参考文献 |
| 6 附图 |
| 第四部分： 兔角膜碱烧伤后泪液乳铁蛋白的表达 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 5 参考文献 |
| 6 附图 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简历 在学期间发表的学术论文与研究成果 |
| 致谢 |
四、人羊膜联合自体角膜缘移植治疗严重眼部烧伤的观察及护理（论文参考文献）
- [1]含LSCs的原代角膜缘上皮细胞片自体移植对犬大面积角膜损伤的疗效研究[D]. 吴艳菊. 扬州大学, 2021
- [2]102例犬细菌性角膜溃疡的流行病学调查及手术对深层角膜溃疡的疗效观察[D]. 张红超. 扬州大学, 2021
- [3]维生素C对小鼠角膜碱烧伤修复作用的实验研究[D]. 陈祖凤. 南京医科大学, 2020(07)
- [4]眼睑缺损修复中组织工程睑板替代材料的应用研究[D]. 徐佩芳. 浙江大学, 2020(01)
- [5]羊膜移植联合自体角膜缘干细胞移植治疗眼部烧伤[J]. 叶国宁,田朋飞,张敏,杨苏云. 国际眼科杂志, 2018(10)
- [6]羊膜对角膜损伤的治疗作用及其机理研究[D]. 郭庆. 哈尔滨工业大学, 2017(01)
- [7]人羊膜间充质干细胞移植对兔角膜碱烧伤的疗效及磁标记示踪分析[D]. 李燕伟. 郑州大学, 2013(10)
- [8]自体角膜缘干细胞分期移植治疗中重度眼部碱烧伤[J]. 李保江,李霞,高晓唯,任兵. 国际眼科杂志, 2007(05)
- [9]新鲜人羊膜移植联合自体角膜缘干细胞移植治疗严重热、化学伤眼病[J]. 张峰伟,黄道平,林亚琴. 现代实用医学, 2007(09)
- [10]新鲜羊膜与自体角膜缘上皮移植对急性眼化学烧伤的修复[J]. 宫玉波,陆晓和,张永强,袁伟,彭小娟. 中国临床康复, 2005(18)