一、鸡球虫的耐药性和解决措施（论文文献综述）
郭双双[1]（2021）在《临床柔嫩艾美耳球虫的抗药性分析和药物作用研究》文中研究表明球虫病是危害畜禽养殖业的常见病,其中鸡球虫病是影响集约化养鸡最重要的寄生虫病,鸡球虫中致病性强、危害大的主要是柔嫩艾美耳球虫。抗球虫药物的使用是长期来控制本病的主要方法,但存在日益严重的球虫耐药性问题,造成巨大的的经济损失。因此,了解临床球虫对一线常用药物的敏感性现状,特别是柔嫩艾美耳球虫的耐药性,同时探索田间混合株和柔嫩艾美耳球虫分离株的耐药一致性,验证不同种属球虫耐药性检测方法的可靠性,对临床科学的用药选择、延缓耐药的产生和球虫耐药的应对等有重要意义。为此,本研究检测了临床田间混合株以及从中各分离的3株柔嫩艾美耳球虫株对11种常用抗球虫药物的敏感性,在分析比较临床耐药现状的基础上,针对分离的耐药柔嫩艾美耳球虫,分别进行了不同抗球虫药物联合、天然药物和抗球虫药物联合以及抗球虫药物和辅助药物联合等方式,探索有效的耐药应对法,以期为改善临床耐药提供线索和参考,主要研究内容如下:成功构建了鉴定七种艾美耳球虫的Taq Man荧光定量PCR方法,方法检测限度为10拷贝,七种球虫质粒的标准曲线和扩增效率等均符合方法学要求。本研究采用球虫的琼脂块单卵囊分离方法,从临床田间混合XYP和HZD中分离到XYP1、XYP2、XYP3和HZD1、HZD2、HZD3共6株柔嫩艾美耳球虫,分别通过其寄生的肠道部位、卵囊和孢子囊的形态结构等生物学特征判断为柔嫩艾美耳球虫,进一步通过荧光定量PCR方法鉴定,确认为6株遗传背景一致的柔嫩艾美耳球虫。利用鸡体试验的抗球虫指数（ACI）、最适抗球虫活性百分率（POAA）、病变计分减少率（RLS）和相对卵囊产量（ROP）4项指标的综合评价方法,分别检测了临床田间混合XYP和HZD株,以及从中分离的柔嫩艾美耳球虫株HZD1、HZD2、HZD3和XYP1、XYP2、XYP3,对癸氧喹酯、二硝托胺、氯羟吡啶、盐酸氯苯胍、马度米星铵、地克珠利、尼卡巴嗪、甲基盐霉素、莫能菌素、磺胺氯吡嗪钠和拉沙洛西钠的耐药性。结果显示,临床球虫对常用的抗球虫药物都存在严重的耐药性,其中山东XYP株对11种临床常用抗球虫药均表现为完全耐药,不同柔嫩艾美耳球虫株之间的耐药性结果不一致,与其来源的田间混合株的耐药情况也有明显的不同。本研究结果提示,基于单卵囊分离的不同种属球虫药物敏感性检测的传统方法存在局限性,鸡球虫不同种属的药物敏感性测试方法还有待进一步研究和完善。采用正交试验设计法,利用单卵囊分离技术分离的耐药柔嫩艾美耳球虫,通过鸡体试验的方法,进行了不同类型抗球虫药物联合应用应对耐药柔嫩艾美耳球虫的可行性,同时探索了天然药物、辅助药物与抗球虫药物联合使用对耐药虫株的有效性,通过对组方的不同因素以及不同水平的药效评价,筛选合理组方和药物的最适剂量。结果发现,尼卡巴嗪与甲基盐霉素以及莫能菌素与癸氧喹酯的联合应用,可以部分提升抗球虫的疗效,此外,氯苯胍的剂量提高可以明显改善药物的敏感性,氯苯胍和甲基盐霉素联合应用有提升药物疗效的趋势,但本试验选用的天然药物、辅助药物对耐药球虫疗效的改善作用不明显,球虫耐药的消除和有效应对方法还有待进一步的探索和研究。综上,本研究通过单卵囊分离技术和q PCR鉴定技术,成功分离鉴定了6株遗传背景一致的柔嫩艾美耳球虫。论文检测并分析了田间混合株和柔嫩艾美耳球虫分离株的耐药性,发现了临床鸡球虫的严重耐药性以及传统方法检测不同种属球虫耐药性方法的局限性。论文还利用不同抗球虫药物联合使用、抗球虫药物和天然药物联合使用以及抗球虫药物和辅助药物联合使用等措施,探索了消减球虫耐药的可能性,为球虫耐药性的研究提供了参考。
姚亚文[2]（2021）在《基于基因组重测序筛选柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药的候选基因及耐药相关基因特性研究》文中研究说明鸡球虫病是一种寄生于鸡肠道危害严重的寄生虫病。目前,该病主要依赖于药物防治,药物的长期广泛使用导致鸡球虫出现严重耐药性。为研究鸡球虫耐药性产生的分子机制,本研究对柔嫩艾美耳球虫敏感株（DS）和盐霉素耐药株（SMR）进行全基因组重测序,利用选择性清除方法筛选出可能与盐霉素耐药相关的候选基因,并对3个耐药相关基因（柔嫩艾美耳球虫保守蛋白35（EtCHP35）、柔嫩艾美耳球虫保守蛋白40（EtCHP40）和柔嫩艾美耳球虫表面抗原（EtSAG））的特性进行了初步分析。1.全基因组重测序与选择性清除筛选柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药相关基因本研究对柔嫩艾美耳球虫10株药物敏感株、3株实验室诱导的盐霉素耐药株和15株单卵囊分离的田间盐霉素耐药株进行了全基因组重测序分析,结果显示样品数据量均在1?Gb以上,Q20≥95%、Q30≥90%,与参考基因组比对结果显示比对率均高于82%,测序深度均大于14%,覆盖度（4×）均高于92%。利用选择性清除方法对柔嫩艾美耳球虫药物敏感株和盐霉素耐药株重测序结果进行分析,获得73个在敏感株受选择基因,共1221个SNPs位点,其中81个SNPs属于非同义突变;获得148个在盐霉素耐药株受选择基因,共2545个SNPs位点,其中118个SNPs位点属于非同义突变。GO富集分析结果显示,敏感株候选基因主要参与生物过程和分子功能,盐霉素耐药株候选基因主要参与生物代谢过程。KEGG通路分析结果显示,敏感株候选基因主要参与吞噬体、氧化磷酸化和新陈代谢等通路,盐霉素耐药株候选基因主要参与吞噬体,新陈代谢等通路。将选择性清除的候选基因与转录组结果关联分析,获得共有基因14个,这些基因主要参与核糖体和ATP转运等通路。2.3个耐药相关基因的克隆和生物信息学分析以柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊c DNA第一链为扩增模板,成功克隆了EtCHP35,EtCHP40和EtSAG的ORF序列。对氨基酸序列分析显示,三个蛋白均无跨膜结构,有多个蛋白酶磷酸化位点,其中EtCHP35含一个逆转录酶位点,EtCHP40含一个天冬氨酸蛋白酶活性位点,EtSAG含一个信号肽,一个苏氨酸富集区,属于表面抗原家族（SAG family member）。成功构建原核重组表达质粒并诱导表达了三个重组蛋白（r EtCHP35,r EtCHP40和r EtSAG）,并制备了相应的抗体。3.3个耐药相关基因特性分析间接免疫荧光定位结果显示EtCHP35和EtCHP40主要分布在子孢子的表面和顶端,EtSAG主要分布在子孢子和第二代裂殖子的表面。体外抑制实验结果显示这3个蛋白与子孢子入侵宿主细胞无关。利用实时荧光定量PCR,对3个基因在柔嫩艾美耳球虫敏感株不同发育阶段以及不同虫株（耐药株和敏感株）的mRNA转录水平进行分析,结果显示EtCHP35和EtSAG基因在敏感株孢子化卵囊阶段的mRNA转录水平最高,EtCHP40基因在第二代裂殖子阶段高表达。与敏感株相比,EtCHP35基因的mRNA转录水平在马杜拉霉素耐药株和盐霉素耐药株第二代裂殖子阶段上调;EtCHP40基因在3株耐药株（地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株、盐霉素耐药株）第二代裂殖子阶段均上调,且在马杜拉霉素耐药株的转录水平显着高于其他耐药株;EtSAG基因的mRNA转录水平在马杜拉霉素耐药株上调,在盐霉素和地克珠利耐药株的转录水平下调。且在不同浓度的盐霉素作用下,EtCHP35和EtCHP40的mRNA转录水平随着药物浓度的升高而升高。上述结果为进一步研究柔嫩艾美耳球虫耐药性产生的分子机制及建立田间鸡球虫耐药性快速检测方法提供了一定的基础。
王海霞[3]（2020）在《柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的诱导及耐药相关基因特性的初步分析》文中研究指明球虫病是世界上危害严重的寄生虫病之一,对养鸡业造成了巨大的经济损失。随着药物的广泛使用及不合理使用,耐药性成为无法避免的问题,但球虫耐药性形成的机制至今不清楚,也没有找到控制球虫产生耐药性的靶基因。本研究通过实验室诱导获得了柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药虫株,观察了盐霉素耐药株和敏感株子孢子和裂殖子的超微结构,分析了盐霉素耐药株和敏感株的差异表达基因,检测了3个鸡球虫田间分离株的耐药状况,利用单卵囊分离技术获得22个柔嫩艾美耳球虫盐霉素田间耐药株,对柠檬酸合酶（EtCS）、甲硫氨酸氨基肽酶（EtMetAP）、锚蛋白重复序列（EtANK）3个球虫耐药相关基因的特性进行了初步分析。1.柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的实验室诱导与电镜观察采用药物浓度递增法,以15 mg/kg（药物/饲料）为起始诱导浓度,经过24次传代,用鸡体药敏试验检测,获得对盐霉素60 mg/kg完全耐药的柔嫩艾美耳球虫耐药株。利用透射电镜观察了盐霉素耐药株子孢子和裂殖子的超微结构,发现耐药株虫体的形态变得不规则、细胞膜粗糙与肿胀、细胞核形状变得不规则甚至溶解、微线减少、支链淀粉增多等。2.柔嫩艾美耳球虫敏感株和耐药株的比较转录组学分析利用RNA-seq对柔嫩艾美耳球虫敏感株和盐霉素耐药株的子孢子和裂殖子进行转录组测序分析。结果显示,与敏感株相比,耐药株子孢子获得17个上调表达基因、13个下调表达基因;耐药株裂殖子获得606个上调表达基因、496个下调表达基因,子孢子和裂殖子共有差异表达基因18个。GO分析发现,耐药株子孢子的差异表达基因主要参与离子结合过程,耐药株裂殖子的差异表达基因主要参与细胞蛋白质代谢过程。用qPCR对差异表达基因进行了验证,结果与转录组测序结果基本一致。3.鸡球虫田间分离株的耐药程度检测与柔嫩艾美耳球虫盐霉素田间耐药株的分离从安徽不同养殖场收集样品,获得3个鸡球虫田间株（AH1、AH2、AH3）,通过鸡体药敏试验检测了田间株对5种抗球虫药物（地克珠利、盐霉素、癸氧喹酯、甲基盐霉素、氯苯胍）的耐药程度,除AH2对氯苯胍中度耐药外,所测虫株对其他药物完全耐药。用琼脂糖技术分离获得22个柔嫩艾美耳球虫单卵囊分离株,用qPCR分析了4个差异表达基因在2个单卵囊分离株及安徽1混合种的mRNA转录水平,与转录组测序结果一致。4.三个耐药相关基因特性的初步分析对3个球虫耐药相关基因（EtCS、EtMetAP、EtANK）进行克隆、表达与纯化,制备相应抗体,分析3个基因在柔嫩艾美耳球虫球虫未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子、裂殖子的转录水平和翻译水平,结果表明这三个基因在四个阶段的转录水平和翻译水平不一致,可能是翻译后修饰的结果。间接免疫荧光表明,EtCS、EtMetAP、EtANK分别定位于子孢子除折光体外的细胞质中、子孢子表面、子孢子的顶端、都定位于裂殖子的细胞膜和细胞质中。体外抑制实验表明,这3个蛋白都参与了子孢子入侵DF-1细胞的过程。用EtCS处理鸡巨噬细胞后发现,EtCS可与巨噬细胞结合,抑制巨噬细胞的增殖及NO的产生。对敏感株和不同耐药株进行转录水平分析,发现这3个基因在柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药株和马杜拉霉素耐药株中表达都显着上调,而在盐霉素耐药株中差异不显着,与转录组结果一致。但这3个基因在耐药株中的蛋白翻译水平与转录结果不一致。利用qPCR分析3个基因在单卵囊分离的盐霉素田间耐药株、安徽1混合种、单卵囊分离的地克珠利田间耐药株的mRNA转录水平,结果显示,与敏感株相比,3个基因在安徽1混合种的转录水平都很低;在3株地克珠利田间耐药株中,除EtCS在其中2株下调表达外,其余都上调表达;在3株盐霉素田间耐药株中,EtMetAP表达上调和EtCS表达下调,EtANK差异不明显;与盐霉素转录组结果不一致,可能是由于分离的田间耐药株存在多重耐药性。结论:本研究利用诱导获得的柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株和敏感株进行比较转录组学分析获得差异表达基因,用田间分离的柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株进行了验证,选取3个耐药相关基因进行初步分析,结果为进一步研究球虫耐药性产生的分子基础提供了基础。
华恩玉[4]（2020）在《堆型艾美耳球虫配子体蛋白EaGAM56与EaGAM82的原核表达及其免疫保护作用研究》文中研究说明鸡球虫病是一种严重危害养鸡业的寄生原虫病,据不完全统计每年球虫病给家禽养殖业造成的经济损失超过30亿美元。长期以来,鸡球虫病的防控主要依赖药物。但随着球虫耐药性的不断增强以及药物残留危害食品安全,鸡球虫病的防控措施由药物防治转向疫苗免疫预防。目前,用于临床的鸡球虫病疫苗主要是活虫苗,亚单位疫苗仅见有一种,即由分离于巨型艾美耳球虫（Eimeriamaxima）配子体的3种蛋白研制而成。堆型艾美耳球虫（E.acervulina）是养鸡场流行最广泛的鸡球虫之一,可引起鸡的亚临床球虫病,影响鸡的生长发育,降低饲料利用率。迄今,国内外对堆型艾美耳球虫配子体蛋白及其基因少有报道,其重组蛋白的免疫保护力也尚无见有报道。为此,本文对堆型艾美耳球虫配子体蛋白56基因（Eagam56）与82基因（Eagam82）进行了克隆和序列分析,分别构建了 2个基因的原核表达质粒,诱导表达后鉴定了重组蛋白的免疫原性,并经动物免疫保护试验评价了重组蛋白对堆型艾美耳球虫的免疫保护力,研究结果将为研制重组配子体抗原亚单位疫苗奠定基础。1.堆型艾美耳球虫Eagam56基因的克隆表达与免疫原性分析提取堆型艾美耳球虫（扬州株）卵囊的基因组DNA,PCR扩增Eagam56基因片段,克隆至pGEM-T-Easy载体;经测序、密码子优化后连接至pET-28a（+）质粒,构建pET-28a（+）-Eagam56表达载体,转化至大肠杆菌BL21;重组菌经酶切和测序鉴定后进行诱导表达,表达产物分别进行SDS-PAGE分析、Western-blot鉴定以及免疫原性分析。结果显示,克隆的Eagam56基因全长为1323 bp,具有一个大小为1323 bp的完整开放阅读框,编码440个氨基酸;与Genbank上的Eagam56基因序列对比,其同源性为99.9%;用在线软件对该基因编码区抗原性进行预测,发现Eagam56基因含有10个抗原决定簇,其中3个位于酪氨酸、脯氨酸富集区;重组蛋白大小约49 kDa,以可溶蛋白形式居多,可被HIS单抗特异性识别,也可被鼠抗重组蛋白多克隆抗体,以及堆型艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫（E.necatrix）、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）感染的鸡阳性血清特异性识别,显示重组蛋白EaGAM56具有良好的免疫原性和交叉抗原性。2.堆型艾美耳球虫Eagam82基因的克隆表达与免疫原性分析提取堆型艾美耳球虫（扬州株）卵囊的基因组DNA,PCR扩增Eagam82基因片段,克隆至pGEM-T-Easy载体;经测序、密码子优化后连接至pET-28a（+）质粒,构建pET-28a（+）-Eagam82表达载体,转化至大肠杆菌BL21;重组菌经酶切和测序鉴定后,对表达产物进行SDS-PAGE分析、Western-blot鉴定以及免疫原性分析。结果显示,克隆的Eagam82基因全长为1704bp,具有一个大小为1704bp的完整开放阅读框,编码568个氨基酸;与Genbank上的Eagam8基因序列对比,其同源性为99.4%;用在线软件对该基因编码区抗原性进行预测,发现Eagam82基因含有15个抗原决定簇,其中2个位于酪氨酸、脯氨酸富集区;重组蛋白大小约82 kDa,以可溶蛋白形式为多;可被HIS单抗特异性识别,也可被鼠抗重组蛋白多克隆抗体,以及堆型艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫感染的鸡阳性血清特异性识别,显示重组蛋白EaGAM82具有良好免疫原性和交叉抗原性。3.重组蛋白rEaGAM56和rEaGAM82及其联合免疫对堆型艾美耳球虫的免疫保护力以黄羽肉鸡为试验动物,以鸡的增重、相对增重率、卵囊减少率、病变记分、抗球虫指数（ACI）以及血清抗体水平等为评价指标,评价重组蛋白rEaGAM56、rEaGAM82以及2种重组蛋白联合应用的免疫保护效果。结果显示,rEaGAM56与rEaGAM82高（200 μg/鸡）、中（100 μg/鸡）剂量免疫组以及联合免疫组,鸡临床症状减轻。随着免疫剂量的增加,鸡的相对增重率与卵囊减少率增加,平均肠道病变记分减少。联合免疫高剂量组（各100 μg/鸡重组蛋白）的相对增重率与卵囊减少率达73.74%和74.27%。rEaGAM56、rEaGAM82、联合免疫高剂量组的 ACI 分别为 148.24、143.92 和 148.74。rEaGAM56的免疫保护力较rEaGAM82的强,rEaGAM56和rEaGAM82免疫鸡后均能产生血清抗体。结论:两种重组蛋白免疫均能产生一定的免疫保护力。
刘剑超[5]（2016）在《邵武市鸡球虫病流行病学调查》文中研究指明鸡球虫病危害重大,分布范围非常广泛,存在于大部分的养鸡场中,而且有很高的发病率,给养殖者带来巨大的经济损失。本研究通过对邵武市19家养鸡场进行了鸡球虫病的流行病学调查,包括鸡只品种、养殖方法、感染日龄等影响因素,旨在为邵武市养鸡业提供正确、合理的防治球虫病的依据。邵武市养鸡业主要集中在水北镇、和平镇、沿山镇、洪墩镇、肖家坊镇。通过对这5个乡镇的19家养鸡场进行调查发现,邵武市感染鸡球虫病的情况比较严重,每个鸡场均检测出球虫,鸡只的平均感染率达到了45.8%,其中水北镇的感染率为54.2%,和平镇的感染率为36.7%,沿山镇的感染率为46.7%,洪墩镇的感染率为46%,肖家坊镇的感染率为38.9%。经过数据统计,以31至60日龄的鸡感染率最高。鸡球虫的感染率还受到养殖方式和饲养管理水平的影响,笼养的感染率大大低于散养,良好的饲养管理水平也大大降低了鸡球虫的阳性率,即使鸡感染了球虫病,也不易暴发。通过对19个鸡场采集的鸡粪的显微镜观察,对鸡球虫卵囊的形态、大小、颜色等方面的辨别,邵武市的球虫种类有6种,分别是柔嫩艾美尔球虫,巨型艾美尔球虫,和缓艾美尔球虫,毒害艾美尔球虫,早熟艾美尔球虫和堆型艾美尔球虫,其中柔嫩艾美尔球虫的检出率最高,为77.2%。在显微镜（10×40）下观察统计球虫卵囊数量,结果显示邵武市球虫感染以轻度感染和中度感染为主,从日龄来看,以31至60日龄感染率最高,感染率为51.1%。通过对球虫进行耐药性试验,结果表明,邵武市的鸡球虫对莫能霉素、盐酸氨丙啉、妥曲珠利最为敏感,对地克珠利、盐霉素、磺胺喹恶啉、硝苯酰胺中度敏感,对马杜拉霉素完全不敏感。
严明,季辉,江善祥[6]（2012）在《鸡球虫耐药性机制研究进展》文中研究表明鸡球虫病是由艾美耳球虫寄生于鸡肠道上皮细胞内所引起的一种寄生虫性疾病。集约化鸡场的各种鸡病中,球虫病的发病率最高,其发病率为50%～70%,死亡率20%～30%,严重时高达80%。鸡球虫病给全球养禽业造成了巨大的经济损失。目前控制鸡球虫病主要依靠抗球虫药物,我国每年
苏子超[7]（2012）在《临沂地区鸡球虫病流行病学调查及抗药性研究》文中指出鸡球虫病是一种由艾美耳属球虫引起的呈世界性分布的寄生虫病,给养鸡业造成巨大的经济损失。鸡球虫种类多,其中致病性最强的是柔嫩艾美耳球虫。目前防治鸡球虫病仍以使用抗球虫药为主,但药物在使用一段时间后,球虫都会对其产生耐药性,耐药性问题已成为药物防治鸡球虫病的主要障碍。目前,临沂地区鸡球虫病的流行情况尚未见报道,本文对临沂地区养殖场鸡球虫病的感染情况进行了调查,球虫总感染率为78%。分批次采取鸡粪便,采用饱和盐水漂浮法收集卵囊,制片镜检,观察卵囊和孢子化卵囊的形状、颜色、测量卵囊的大小,同时感染实验动物,记录寄生部位和病变情况,进行综合鉴定,鉴定出艾美尔属（Eimeria）球虫4种,即柔嫩艾美尔球虫（E. tenella）,堆型艾美尔球虫（E. acervulina）、巨型艾美尔球虫（E. maxima）口毒害艾美尔球虫（E. necatrix）,其中柔嫩艾美尔球虫（E. tenella）为本地鸡场球虫病病原的优势种,检出率52.31%,侵害鸡的盲肠,导致贫血、消瘦、甚至死亡。发病鸡以15-40日龄的雏鸡多。应用单卵囊分离技术成功分离出纯种球虫虫株,采用临沂地区常用的6种抗球虫药（癸氧喹酯、磺胺氯吡嗪钠、常山酮、地克珠利、氨丙林与妥曲珠利）对14日龄的雏鸡进行药物敏感实验,采用相对卵囊产量（ROP）.病变记分减少率（RLS）、最适抗球虫活性百分数（POAA）和抗球虫指数（ACI）等4项指标对抗药性的结果进行综合判定。4项指标均为阴性判为无抗药性（敏感）,有1项指标为阳性判为轻度抗药,有2项指标为阳性判为中度抗药,有3项及以上指标为阳性者则判为完全抗药。结果表明,磺胺氯吡嗪钠和地克珠利都具有完全抗药性,常山酮和癸氧喹酯中度耐药,故用这些药物防治此鸡场鸡艾美耳球虫病效果不佳；实验中球虫对氨丙林与妥曲珠利高度敏感,所以在此鸡场防治鸡艾美耳球虫病的临床应用中可推荐为首选药。
韦园园[8]（2012）在《广西部分地区鸡球虫抗药性的研究》文中研究表明鸡球虫抗药性是目前防治鸡球虫病面临的主要问题,为了解广西地区的鸡球虫耐药性状况,作者采集和分离了广西南宁、贵港、梧州、百色、钦州等5个市的鸡球虫虫株,并采用这些地区养鸡场常用的抗球虫药物进行了抗药性研究。试验设有感染不用药对照组（阳性对照）、不感染不用药对照组（阴性对照）和若干药物组,以抗球虫指数（ACI）、相对卵囊产量（ROP）、病变记分减少率（RLS）、最适抗球虫活性百分率（POAA）为试验指标,进行综合评定,其抗药程度分为无抗药性、轻度抗药性、中度抗药性、完全抗药性4个等级。研究结果显示从各地分离的球虫虫株对试验所使用的抗球虫药物均产生不同程度的抗药性,其中南宁市鸡球虫虫株对磺胺氯吡嗪钠、氨丙啉、地克珠利、氯苯胍等四种当地常用抗球虫药都具有完全抗药性；贵港市的鸡球虫虫株对爱力球安、妥曲球安这两种当地常用的抗球虫药都具有完全抗药性,对球虫三治这种抗球虫药具有为中等抗药性；梧州市的鸡球虫虫株对球血力、三字球虫粉、妥曲球克、地克珠利等四种当地常用抗球虫药都具有完全抗药性；百色市的鸡球虫虫株对球血力为轻度抗药性,对血球立杀、三字球虫粉、球必清这三种抗球虫药为中度抗药性；钦州市的鸡球虫虫株对血球立杀、三字和三字球虫粉这三种当地常用的抗球虫药都具有完全抗药性。研究结果证明：广西鸡球虫抗药性已非常严重,大部分地区的鸡球虫虫株对市场上销售的抗球虫药已具有完全抗药性,鸡球虫病发生时用这些化学药物防治已基本上没有效果,因此必须寻找新的抗球虫药和新的预防鸡球虫病的方法才能有效控制鸡球虫病,减少经济损失,提高养鸡的效益。
李佩国[9]（2010）在《河北省鸡柔嫩艾美耳球虫地方株的耐药性检测》文中研究说明河北省鸡柔嫩艾美耳球虫地方株的生物学特性：运用单卵囊分离技术,从河北省主要养鸡地区秦皇岛、唐山、石家庄分离并纯化得到鸡柔嫩艾美耳球虫秦皇岛株、唐山株、石家庄株,观察和测定了柔嫩艾美耳球虫地方株的生物学特性,并与柔嫩艾美耳球虫敏感株和耐盐霉素株进行对比,结果表明：（1）各虫株卵囊均寄生于盲肠,卵囊呈卵圆形,壁光滑,分两层。（2）唐山株的卵囊潜隐期最长,为142h,,而秦皇岛株、石家庄株的潜隐期与敏感株、耐药株相似,分别为137h、133h、132h、135h；（3）秦皇岛株、唐山株、石家庄株、敏感株和耐药株的最短孢子化时间分别为19h、17h、20h、20h和18h。（4）唐山株、石家庄株、秦皇岛株和耐药株的卵囊大小平均为24.11μm×19.07μm、23.41μm×19.34μm、24.89μm×20.14μm和24.06μm×19.50μm,卵形指数基本一致,分别为1.26、1.21、1.24和1.23；而敏感株的卵囊大小平均为24.13μm×20.37μm,卵形指数最小,为1.18。（5）不同地方株OPG最高值出现在感染后的第7～8d,各虫株在感染后7～9d的排卵囊量占总量值相近,达75.62%～86.06%。本试验结果为进一步开展药物的疗效试验和鸡球虫耐药机理等研究奠定了基础。河北省鸡柔嫩艾美耳球虫地方株耐药性的测定及耐药谱变迁分析：通过药敏试验,以最适抗球虫活性百分率（POAA）、病变记分减少率（RLS）、相对卵囊产量（ROP）、抗球虫指数（ACI）为指标,测定了秦皇岛株、唐山株、石家庄株柔嫩艾美耳球虫对克球粉、氨丙啉、马杜霉素、瑞冠球、尼卡巴嗪、金三特、球敌等常用抗球虫药的耐药性,结果表明,秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫对球敌呈现完全耐药性,对克球粉、瑞冠球和金三特呈现中度耐药,对马杜霉素、尼卡巴嗪和氨丙啉则呈现轻度耐药。唐山株柔嫩艾美耳球虫对尼卡巴嗪和氨丙啉均表现无耐药性,而对马杜霉素、金三特和球敌均表现完全耐药性；对克球粉和瑞冠球则呈中度耐药性。石家庄株柔嫩艾美耳球虫对金三特和氨丙啉均表现无耐药性,对瑞冠球呈轻度耐药性,而对马杜霉素、克球粉和球敌均表现完全耐药性。同时,采用回顾性调查法,分析了2004～2008年分离的秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫的耐药谱,结果提示该虫株对常用抗球虫药物的耐药谱增宽,耐药率呈递增趋势,对已经产生完全耐药的抗球虫药物如磺胺喹恶啉钠,在停用一段时间后,对该药物的敏感性得到了一定程度的恢复。该试验结果为当地鸡球虫病的合理用药和高效防治提供了可靠的依据。河北省鸡嫩艾美耳球虫田间多重耐药虫株的耐药相关基因的筛选：以敏感株作对照,采用Trizol试剂法提取秦皇岛、唐山和石家庄柔嫩艾美耳球虫多重耐药虫株的总RNA。用3种锚定引物和20种随机引物进行RT-PCR,产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染,共回收26条差异条带,进行2次PCR扩增,产物回收纯化,回收12条差异条带,其浓度大约20-50ng。对12条质粒克隆鉴定的差异带进行反向Northern Dot-blotting点杂交鉴定3个片段为阳性,对阳性克隆测序、同源性比较。其中来自于石家庄田间多重耐药性虫株mRNA的S116序列与Genebank和Sanger上已经发表的柔嫩艾美耳球虫第一段染色体上882bp长的序列同源性高达99%,为未知蛋白；分别来自唐山和秦皇岛田间多重耐药性虫株mRNA的T311和Q19序列为未知新序列。这些耐药相关基因片段可能参与了球虫抗球虫药耐药性产生的过程。
王凤[10]（2010）在《鸡体实验法及同工酶谱分析检测柔嫩艾美耳球虫的耐药性》文中进行了进一步梳理鸡球虫是由艾美耳属一种或多种球虫寄生于鸡体内所引起的呈世界性分布的原虫病,该病对雏鸡的危害十分严重,给养鸡业造成了巨大的经济损失。鸡球虫种类多,其中致病性最强的是柔嫩艾美耳球虫。到目前为止,鸡球虫病的防治仍以药物控制为主,但由于抗球虫药的长期使用,鸡球虫耐药性的产生已成为无法避免的问题。为探索一种合理的用药方案,并检测鸡球虫耐药性的产生情况,实验采集了安庆、肥东及巢湖三个地区的3株盲肠球虫,进行了柔嫩艾美耳球虫（E.tellena）单卵囊的分离;并采用鸡体实验法,以抗球虫指数（ACI）、病变记分减少率（RLS）、相对盲肠卵囊产量（ROP）和最适抗球虫活性百分率（POAA）四项指标综合判定,检测了安庆、肥东及巢湖三个地区的3株E.tenenlla对当前这些地区相对常用的4种药物-癸氧喹酯、尼卡巴嗪、球痢灵和磺胺氯吡嗪钠这四种药物的耐受性产生状况。其结果显示:安庆株、肥东株、巢湖株对癸氧喹酯的四项指标都呈阴性,表现为敏感;对尼卡巴嗪均的四项指标都呈阳性,表现为完全耐药。安庆株对球痢灵的四项指标检测结果为:ACI 160.70（-）、RLS 85.77（-）、POAA 33.35（+）、ROP 17.82（+）,中度耐药;安庆株对磺胺氯吡嗪钠的四项指标检测结果为:ACI 140.52（+）、RLS 78.45（-）、POAA 32.96（+）、ROP 30.46（+）,重度耐药。肥东株对球痢灵的四项指标检测结果为:ACI 148.02（+）、RLS 90.81（-）、POAA 51.79（-）、ROP 9.04（-）,轻度耐药;肥东株对磺胺氯吡嗪钠的四项指标检测结果为:ACI 139.02（+）、RLS 81.34（-）、POAA 44.96（+）、ROP 42.16（+）,重度耐药。巢湖株对球痢灵的四项指标检测结果为ACI 150.22（+）、RLS 76.15（-）、POAA 45.18（+）、ROP 37.57 （+）,重度耐药;巢湖株对磺胺氯吡嗪钠的四项指标检测结果为:ACI 96.05（+）、RLS 27.59（+）、POAA 11.33（+）、ROP 48.73（+）,完全耐药。根据3株E.tenenlla耐药性的产生情况,实验还采用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳,以上海敏感标准E.tellena株和南京敏感标准E.tellena株为参照,分析了该3株E.tenella球虫的乳酸脱氢酶（LDH）、磷酸葡萄糖异构酶（GPI）和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）同工酶谱,尼卡巴嗪、磺胺氯吡嗪钠耐药后都有一条LDH特异性同工酶谱,尼卡巴嗪还有一条GPI特异性同工酶谱,但是球虫对尼卡巴嗪、磺胺氯吡嗪钠和球痢灵耐药后不会引起体内G6PD酶的变化。最后,在耐药性检测基础上,设置不同浓度的氯氟苄腺嘌呤（30mg/kg、60 mg/kg、90mg/kg）和磺胺氯吡嗪钠（600 mg/kg）进行疗效对比,以抗球虫指数（ACI）、病变记分、存活率、相对增重率以及卵囊产量来判定抗球虫效果,结果显示氯氟苄腺嘌呤90g/kgACI为187.19,属于高效抗球虫药物,对已经出现重度耐药的虫株仍有较好的抗球虫效果。
二、鸡球虫的耐药性和解决措施（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、鸡球虫的耐药性和解决措施（论文提纲范文）
（1）临床柔嫩艾美耳球虫的抗药性分析和药物作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 鸡球虫病背景 |
| 1.2 E.tenella概述 |
| 1.2.1 发病原因 |
| 1.2.2 发病机理 |
| 1.2.3 鉴定方法的研究 |
| 1.3 抗球虫药物概述 |
| 1.3.1 抗球虫药物的简介 |
| 1.3.2 抗球虫药物的耐药进展 |
| 1.4 球虫病的防治 |
| 1.4.1 天然药物 |
| 1.4.2 延缓药物代谢 |
| 1.5 本研究的目的意义 |
| 第二章 E.tenella的分离与鉴定 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试验仪器与试剂 |
| 2.1.2 试验虫株 |
| 2.1.3 试验动物的选用 |
| 2.1.4 荧光定量PCR引物 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 E.tenella的单卵囊分离与采集 |
| 2.2.2 E.tenella的扩增 |
| 2.2.3 E.tenella分离株的鉴定 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 分离株的鉴定结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 田间混合株和柔嫩分离株对常用抗球虫药的耐药性检测 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 试验仪器与试剂 |
| 3.1.2 试验虫株 |
| 3.1.3 试验动物的选用 |
| 3.1.4 试验药物 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 田间混合株和柔嫩分离株的耐药性检测 |
| 3.2.2 耐药性的评判 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 田间混合株的抗性分析 |
| 3.3.2 田间混合XYP株中三株分离株的抗性分析 |
| 3.3.3 田间混合HZD株中三株分离株的抗性分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 药物联合应用对柔嫩XYP1分离株的防治效果试验 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 试验仪器与试剂 |
| 4.1.2 试验虫株 |
| 4.1.3 试验动物的选用 |
| 4.1.4 试验药物 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 不同复方的剂量水平 |
| 4.2.2 E.tenella的联合用药试验与药效评判方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 柔嫩分离株XYP1对癸氧喹酯与莫能菌素联合应用的结果 |
| 4.3.2 柔嫩分离株XYP1对尼卡巴嗪与甲基盐霉素联合应用的结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 田间混合株和柔嫩分离株耐药应对方法的试验 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 试验仪器与试剂 |
| 5.1.2 试验虫株 |
| 5.1.3 试验动物的选用 |
| 5.1.4 试验药物 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 柔嫩分离株的耐药消除 |
| 5.2.2 田间混合株的耐药消除和评判方法 |
| 5.2.3 不同复方的剂量水平 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 XYP1分离株的耐药消除 |
| 5.3.2 XYP2分离株的耐药消除 |
| 5.3.3 XYP混合株的耐药消除 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（2）基于基因组重测序筛选柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药的候选基因及耐药相关基因特性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 抗球虫药 |
| 1.1.1 聚醚离子载体类抗球虫药 |
| 1.1.2 化学合成类抗球虫药 |
| 1.2 鸡球虫耐药性产生的原因 |
| 1.2.1 遗传因素 |
| 1.2.2 药物选择压力 |
| 1.2.3 生物学因素 |
| 1.3 鸡球虫耐药性的研究现状 |
| 1.4 其他顶复门原虫耐药性的研究现状 |
| 1.5 全基因组重测序 |
| 1.6 选择性清除 |
| 1.7 展望 |
| 第二章 全基因组重测序筛选柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药相关基因 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 试验动物 |
| 2.2.2 实验虫株 |
| 2.2.3 试验药物 |
| 2.2.4 实验试剂 |
| 2.2.5 实验仪器 |
| 2.2.6 子孢子的收集与纯化 |
| 2.2.7 基因组重测序 |
| 2.2.8 选择性清除分析结果与转录组测序结果的关联分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 虫体的收集与纯化 |
| 2.3.2 DNA的提取检测 |
| 2.3.3 质控结果 |
| 2.3.4 样品与参考基因组比对结果 |
| 2.3.5 基于Hp&Fst的选择消除分析结果 |
| 2.3.6 候选基因SNP位点的分布 |
| 2.3.7 基因功能富集分析 |
| 2.3.8 与转录组的关联分析结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 3 个耐药相关基因的克隆和生物信息学分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验动物和实验虫株 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 试验仪器 |
| 3.2.4 敏感株孢子化卵囊的收集与纯化 |
| 3.2.5 cDNA第一链模板的制备 |
| 3.2.6 基因克隆 |
| 3.2.7 生物信息学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 基因的克隆 |
| 3.3.2 生物信息学分析 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 3个耐药相关基因功能特性的初步分析 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 实验动物与细胞 |
| 4.2.2 实验虫株 |
| 4.2.3 实验试剂 |
| 4.2.4 实验仪器 |
| 4.2.5 实验虫株的收集与纯化 |
| 4.2.6 cDNA模板的制备 |
| 4.2.7 重组表达质粒的构建 |
| 4.2.8 重组蛋白的诱导表达 |
| 4.2.9 重组蛋白的纯化 |
| 4.2.10 重组蛋白的反应原性分析 |
| 4.2.11 多克隆抗体的制备 |
| 4.2.12 实时荧光定量PCR |
| 4.2.13 间接免疫荧光定位 |
| 4.2.14 体外抑制实验 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 重组表达质粒的构建 |
| 4.3.2 重组蛋白的诱导表达 |
| 4.3.3 重组蛋白的纯化 |
| 4.3.4 重组蛋白的反应原性分析 |
| 4.3.5 3个基因在DS不同发育阶段的mRNA转录水平 |
| 4.3.6 三个蛋白在DS虫体上的定位分析 |
| 4.3.7 三个多克隆抗体对子孢子入侵DF-1细胞体外抑制实验 |
| 4.3.8 3个基因在不同耐药株和敏感株的转录水平分析 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（3）柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的诱导及耐药相关基因特性的初步分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 耐药性的定义 |
| 1.2 耐药性的类型 |
| 1.2.1 交叉耐药性 |
| 1.2.2 多重耐药性 |
| 1.3 实验室耐药虫株的诱导 |
| 1.4 耐药性检测的方法 |
| 1.4.1 鸡体检测法 |
| 1.4.2 同工酶分析法 |
| 1.4.3 超微结构的比较法 |
| 1.4.4 PCR技术测定法 |
| 1.5 抗球虫药物作用机理及其耐药性 |
| 1.5.1 离子载体类抗生素及其耐药机理 |
| 1.5.2 磺胺类抗球虫药物的耐药性 |
| 1.5.3 喹啉类抗球虫药物耐药性 |
| 1.5.4 抗硫胺素类抗球虫药物耐药性 |
| 1.5.5 吡啶类抗球虫药物的耐药性 |
| 1.5.6 三嗪类抗球虫药物及其耐药性 |
| 1.6 控制鸡球虫耐药性产生的策略 |
| 1.6.1 控制球虫的传播 |
| 1.6.2 合理的用药方案 |
| 1.6.3 综合治疗 |
| 1.6.4 定期检测耐药性 |
| 1.7 展望 |
| 第二章 柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的实验室诱导 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 试验虫株 |
| 2.2.3 实验试剂 |
| 2.2.4 实验仪器 |
| 2.2.5 试验药物 |
| 2.2.6 柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的实验室诱导 |
| 2.2.7 透射电子显微镜观察盐霉素耐药株与敏感株子孢子和第二代裂殖子的超微结构 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的诱导 |
| 2.3.2 诱导虫株的耐药性检测 |
| 2.3.3 透射电子显微镜观察敏感株与耐药株的超微结构 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 柔嫩艾美耳球虫敏感株与盐霉素耐药株差异基因的筛选与验证 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验虫株 |
| 3.2.3 实验药物 |
| 3.2.4 实验试剂 |
| 3.2.5 实验仪器 |
| 3.2.6 敏感株与盐霉素耐药株子孢子和第二代裂殖子的收集与纯化 |
| 3.2.7 敏感株和盐霉素耐药株子孢子和第二代裂殖子转录组测序 |
| 3.2.8 敏感株和盐霉素耐药株子孢子和第二代裂殖子差异表达基因的验证 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 敏感株和盐霉素耐药株子孢子和第二代裂殖子总RNA的提取 |
| 3.3.2 敏感株和盐霉素耐药株子孢子和第二代裂殖子测序数据生物信息分析 |
| 3.3.3 敏感株和盐霉素耐药株子孢子和第二代裂殖子差异基因的筛选 |
| 3.3.4 敏感株和盐霉素耐药株子孢子和第二代裂殖子差异基因的验证 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 现场鸡球虫感染现状和耐药程度调查及盐霉素田间耐药株的分离 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 试验药物 |
| 4.2.3 实验试剂 |
| 4.2.4 实验仪器 |
| 4.2.5 田间株粪便样品的收集及繁殖 |
| 4.2.6 形态学鉴定田间株球虫种类 |
| 4.2.7 多重PCR鉴定球虫种类 |
| 4.2.8 药敏试验验证田间株耐药性 |
| 4.2.9 抗盐霉素田间株单卵囊的分离 |
| 4.2.10 qPCR分析差异表达基因在田间分离株的转录水平 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 形态学鉴定田间株球虫种类 |
| 4.3.2 多重PCR鉴定球虫种类 |
| 4.3.3 药敏试验验证田间株耐药性 |
| 4.3.4 单卵囊分离田间盐霉素耐药株 |
| 4.3.5 差异表达基因在单卵囊分离株和田间混合种转录水平的分析 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 3个耐药相关基因功能特性初步研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 实验虫株、原核表达载体及细胞 |
| 5.2.3 实验试剂 |
| 5.2.4 实验仪器 |
| 5.2.5 敏感株孢子化卵囊的收集与纯化 |
| 5.2.6 敏感株孢子化卵囊总RNA的提取与c DNA的合成 |
| 5.2.7 耐药基因的扩增 |
| 5.2.8 基因的生物信息学分析 |
| 5.2.9 重组表达质粒的构建 |
| 5.2.10 重组蛋白的诱导表达与纯化 |
| 5.2.11 重组蛋白反应原性分析 |
| 5.2.12 抗重组蛋白多克隆抗体的制备 |
| 5.2.13 耐药基因在不同发育阶段和不同耐药株的转录水平分析 |
| 5.2.14 耐药基因在不同发育阶段和不同耐药株的翻译水平分析 |
| 5.2.15 耐药相关蛋白在子孢子入侵DF-1细胞后的定位 |
| 5.2.16 田间盐霉素耐药株和地克珠利耐药株对耐药基因进行验证 |
| 5.2.17 多克隆抗体对子孢子入侵DF-1细胞体外抑制实验 |
| 5.2.18 柠檬酸合酶对体外培养鸡巨噬细胞功能的影响 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 敏感株孢子化卵囊的总RNA提取 |
| 5.3.2 耐药基因的克隆 |
| 5.3.3 基因的生物信息学分析 |
| 5.3.4 重组表达质粒的构建 |
| 5.3.5 重组蛋白的表达与纯化 |
| 5.3.6 重组蛋白的反应原性分析 |
| 5.3.7 三个基因在不同发育阶段的转录水平及翻译水平分析 |
| 5.3.8 三个基因在不同耐药株中的转录和翻译水平分析 |
| 5.3.9 三个基因在田间分离株的mRNA转录水平分析 |
| 5.3.10 三个蛋白在子孢子入侵DF-1细胞后的定位分析 |
| 5.3.11 多克隆抗体对子孢子入侵DF-1细胞体外抑制实验 |
| 5.3.12 柠檬酸合酶对体外培养鸡巨噬细胞功能的影响 |
| 5.3.13 r Et CS对一氧化氮(NO)生成量的测定 |
| 5.4 讨论 |
| 第六章 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（4）堆型艾美耳球虫配子体蛋白EaGAM56与EaGAM82的原核表达及其免疫保护作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 文献综述 鸡球虫病防治研究进展 |
| 1 鸡球虫的生物学特征 |
| 2 鸡球虫病的诊断与防治 |
| 3 鸡球虫病的免疫预防 |
| 4 本研究的目的与意义 |
| 第一章 堆型艾美耳球虫配子体蛋白gam56基因的克隆与表达及其免疫原性分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二章 堆型艾美耳球虫配子体蛋白gam82基因的克隆与表达及其免疫原性分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三章 重组蛋白rEaGAM56和rEaGAM82及其联合免疫对堆型艾美耳球虫的免疫保护力 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（5）邵武市鸡球虫病流行病学调查（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 综述 |
| 1.1 鸡球虫病的概况 |
| 1.1.1 鸡球虫病对养殖业的危害 |
| 1.1.2 鸡球虫病的病原 |
| 1.1.3 鸡球虫的生活史 |
| 1.1.4 鸡球虫病的致病性 |
| 1.1.5 鸡球虫病的临床症状 |
| 1.1.6 鸡球虫病的病理变化 |
| 1.1.7 鸡球虫病的诊断 |
| 1.1.8 影响鸡球虫病流行的因素 |
| 1.1.9 鸡球虫病的药物防治 |
| 1.1.10 鸡球虫的药物敏感性概况 |
| 1.1.11 综合防控措施 |
| 1.2 试验研究的目的和意义 |
| 第二章 邵武鸡球虫病的流行病学情况 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 调查地点选择 |
| 2.1.2 样品的收集 |
| 2.1.3 样品的处理 |
| 2.1.4 鸡球虫感染强度的判定 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 各个调查地点及球虫的感染率 |
| 2.2.2 邵武市各个调查地点鸡球虫病的感染强度 |
| 2.2.3 各个日龄阶段鸡球虫感染情况 |
| 2.2.4 不同品种鸡的感染球虫状况 |
| 2.2.5 不同饲养管理水平对鸡感染球虫的影响 |
| 2.2.6 不同的养殖方式对鸡球虫感染率的影响 |
| 2.2.7 各个乡镇养鸡场不同艾美耳球虫的检出率 |
| 2.2.8 抗鸡球虫药物的选择 |
| 第三章 讨论 |
| 3.1 鸡球虫鉴别方法的讨论 |
| 3.2 邵武市鸡球虫病流行情况分析 |
| 3.3 邵武市鸡球虫的耐药性初步调查情况分析 |
| 3.4 鸡球虫病的综合性防治 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（7）临沂地区鸡球虫病流行病学调查及抗药性研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略表 |
| 目录 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 一、鸡球虫病原学研究进展 |
| 1.1 病原学 |
| 1.2 鸡球虫发育史 |
| 1.3 流行病学 |
| 1.3.1 宿主 |
| 1.3.2 传染源和传播媒介 |
| 1.3.3 传播媒介 |
| 1.3.4 流行特点 |
| 二、鸡球虫防治研究进展 |
| 2.1 加强饲养管理 |
| 2.2 免疫预防 |
| 2.3 药物预防与治疗 |
| 2.4 抗球虫药与球虫病疫苗的联合应用 |
| 2.5 鸡球虫病药物防治存在的问题 |
| 实验一 临沂市鸡球虫流行病学调查 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 粪样的采集 |
| 2.2 球虫卵囊的收集和观察 |
| 2.3 卵囊分离培养及鉴定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 鸡球虫的感染情况 |
| 3.2 感染球虫的种类 |
| 4 讨论 |
| 实验二 鸡球虫的抗药性研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 供试药物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 琼脂块的制作 |
| 2.2 卵囊液的稀释 |
| 2.3 单卵囊的分离 |
| 3 人工感染 |
| 4 球虫卵囊的增殖和纯化 |
| 5 抗药性实验 |
| 5.1 实验准备与分组 |
| 5.2 感染与给药 |
| 5.3 测定指标 |
| 6 结果与分析 |
| 6.1 单卵囊的鉴定 |
| 6.2 耐药性实验结果 |
| 7 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介及硕士期间发表论文 |
| 攻读学位期间获得研究成果 |
（8）广西部分地区鸡球虫抗药性的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 目录 |
| 1、文献综述 |
| 1.1 我国目前鸡球虫抗药性的现状 |
| 1.2 球虫抗药性的特点 |
| 1.2.1 抗药性产生速度因药物类型不同而有别 |
| 1.2.2 对药物的耐受具有一定的差异性 |
| 1.2.3 耐受超浓度的抗球虫药 |
| 1.2.4 具有相对稳定性和可遗传性 |
| 1.2.5 交叉/多重耐药性 |
| 1.2.6 敏感性的恢复 |
| 1.3 抗药性的检测方法 |
| 1.3.1 鸡体实验法 |
| 1.3.2 PCR测定法 |
| 1.3.3 同工酶分析测定法 |
| 1.3.4 超微结构比较法 |
| 1.4 敏感性恢复及抗药性的获得 |
| 1.4.1 抗药性的获得途径 |
| 1.4.2 抗药性获得的应用 |
| 1.4.3 敏感性的恢复 |
| 1.5 抗药性的应对措施 |
| 1.5.1 使用球虫疫苗 |
| 1.5.2 开发使用中草药 |
| 1.5.3 合理用药 |
| 1.5.4 新药研制 |
| 1.5.5 营养添加剂的抗球虫作用 |
| 2、实验研究部分 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 感染用卵囊的采集、繁殖 |
| 2.1.2 试验用动物 |
| 2.1.3 试验用饲料 |
| 2.1.4 试验用药物 |
| 2.1.5 抗药性试验分组 |
| 2.1.6 抗药性试验步骤 |
| 2.1.7 抗药性判断方法及标准 |
| 2.1.8 主要试验用仪器、设备、试剂 |
| 2.2 试验结果与分析 |
| 2.2.1 南宁市鸡球虫抗药性试验结果 |
| 2.2.2 贵港市鸡球虫抗药性试验结果 |
| 2.2.3 梧州市鸡球虫抗药性试验结果 |
| 2.2.4 百色市鸡球虫抗药性试验结果 |
| 2.2.5 钦州市鸡球虫抗药性试验结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
（9）河北省鸡柔嫩艾美耳球虫地方株的耐药性检测（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第1章 抗球虫药及其鸡球虫耐药性研究进展 |
| 1.1 抗球虫药种类 |
| 1.1.1 离子载体类抗球虫药 |
| 1.1.2 化学合成类抗球虫药 |
| 1.2 鸡球虫耐药性概况 |
| 1.3 鸡球虫耐药性的检测 |
| 1.3.1 鸡体测定法 |
| 1.3.2 细胞培养法 |
| 1.3.3 鸡胚培养法 |
| 1.3.4 超微结构比较法 |
| 1.3.5 同工酶电泳测定法 |
| 1.3.6 分子生物学检测法 |
| 1.4 鸡球虫耐药性防制措施 |
| 1.4.1 合理用药程序 |
| 1.4.2 开发利用中草药 |
| 1.4.3 营养调控 |
| 1.4.4 免疫预防 |
| 第2章 河北省鸡柔嫩艾美耳球虫地方株的部分生物学特性 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 不同株柔嫩艾美耳球虫的潜隐期和最早孢子化时间的比较 |
| 2.2.2 不同株柔嫩艾美耳球虫卵囊OPG比较 |
| 2.2.3 不同株柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊形态和各度量值之间的对比 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 河北省鸡柔嫩艾美耳球虫地方株的耐药性测定及耐药谱变迁分析 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 常用药物对鸡柔嫩艾美耳球虫的抗球虫活性 |
| 3.2.2 常用药物鸡感染柔嫩艾美耳球虫后的肠道病变的影响 |
| 3.2.3 常用药物对鸡抑制柔嫩艾美耳球虫卵囊产量的影响 |
| 3.2.4 常用药物对柔嫩艾美耳球虫ACI的影响 |
| 3.2.5 柔嫩艾美耳球虫对常用药物耐药性的综合判定 |
| 3.2.6 秦皇岛(QHD)株柔嫩艾美耳球虫的耐药谱变迁 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 河北省鸡柔嫩艾美耳球虫地方株的耐药谱分析 |
| 3.3.2 秦皇岛株柔嫩艾美耳球虫耐药谱变迁规律 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 河北省鸡柔嫩艾美耳球虫田间多重耐药虫株的耐药相关基因的筛选 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 总RNA的提取、定量与鉴定 |
| 4.2.2 不同株柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊mRNA的RT-PCR |
| 4.2.3 银染聚丙烯酰胺凝胶电泳 |
| 4.2.4 差异条带的回收和2次PCR扩增 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 总RNA的提取 |
| 4.3.2 柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊的RT-PCR和差异显示 |
| 4.3.3 变性聚丙烯凝胶电泳和差异条带的显色 |
| 4.3.4 基因序列分析 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 结论 |
| 5.1 探明了柔嫩艾美耳球虫不同地方株的部分生物性特性 |
| 5.2 确定了河北省主要养鸡地区柔嫩艾美耳球虫不同地方株的耐药谱,为鸡球虫病的合理用药和高效防治提供了可靠的依据 |
| 5.3 探明了柔嫩艾美耳球虫秦皇岛株的耐药谱变迁规律 |
| 5.4 发现了3个与河北省柔嫩艾美耳球虫田间多重耐药株耐药相关基因的序列,即S116、T311和Q19序列 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介及科研成果 |
| 致谢 |
（10）鸡体实验法及同工酶谱分析检测柔嫩艾美耳球虫的耐药性（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 文献综述 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 主要仪器 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 虫卵 |
| 1.1.4 实验动物 |
| 1.1.5 供试药物 |
| 1.1.6 制备电泳样品 |
| 1.1.7 配制试剂 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 鸡球虫卵囊的分离与鉴定 |
| 1.2.2 单卵囊的分离与培养 |
| 1.2.3 耐药性检测 |
| 1.2.4 同工酶电泳 |
| 1.2.5 氯氟苄腺嘌呤与磺胺氯吡嗪钠疗效对比实验 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 单卵囊分离 |
| 2.1.1 单卵囊大小的测量 |
| 2.1.2 单卵囊感染后雏鸡球虫卵囊排出情况 |
| 2.2 柔嫩艾美艾球虫形态学鉴定 |
| 2.2.1 卵囊形态观察 |
| 2.2.2 卵囊大小测量结果 |
| 2.2.3 临床症状及寄生部位观察结果 |
| 2.3 耐药性检测结果 |
| 2.3.1 ACI 所得结果 |
| 2.3.2 POAA 所得结果 |
| 2.3.3 RLS 和ROP 所得结果 |
| 2.3.4 安庆株对4 种药物的敏感性结果 |
| 2.3.5 肥东株对4 种药物的敏感性结果 |
| 2.3.6 巢湖株对4 种药物的敏感性结果 |
| 2.4 同工酶电泳 |
| 2.4.1 LDH 同工酶电泳图 |
| 2.4.2 GPI 同工酶电泳图 |
| 2.4.3 G6PD 同工酶电泳图 |
| 2.5 氯氟苄腺嘌呤与磺胺氯吡嗪钠疗效对比实验 |
| 3 讨论 |
| 3.1 单卵囊分离技术的建立 |
| 3.2 鸡球虫形态学鉴定 |
| 3.3 耐药性检测 |
| 3.4 同工酶电泳 |
| 3.5 疗效对比实验 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 在读期间发表的学术论文 |
四、鸡球虫的耐药性和解决措施（论文参考文献）
- [1]临床柔嫩艾美耳球虫的抗药性分析和药物作用研究[D]. 郭双双. 中国农业科学院, 2021(09)
- [2]基于基因组重测序筛选柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药的候选基因及耐药相关基因特性研究[D]. 姚亚文. 中国农业科学院, 2021
- [3]柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的诱导及耐药相关基因特性的初步分析[D]. 王海霞. 中国农业科学院, 2020
- [4]堆型艾美耳球虫配子体蛋白EaGAM56与EaGAM82的原核表达及其免疫保护作用研究[D]. 华恩玉. 扬州大学, 2020
- [5]邵武市鸡球虫病流行病学调查[D]. 刘剑超. 福建农林大学, 2016(05)
- [6]鸡球虫耐药性机制研究进展[J]. 严明,季辉,江善祥. 养禽与禽病防治, 2012(11)
- [7]临沂地区鸡球虫病流行病学调查及抗药性研究[D]. 苏子超. 山东农业大学, 2012(08)
- [8]广西部分地区鸡球虫抗药性的研究[D]. 韦园园. 广西大学, 2012(03)
- [9]河北省鸡柔嫩艾美耳球虫地方株的耐药性检测[D]. 李佩国. 吉林大学, 2010(06)
- [10]鸡体实验法及同工酶谱分析检测柔嫩艾美耳球虫的耐药性[D]. 王凤. 安徽农业大学, 2010(04)