一、实验大鼠、小鼠胚胎的缓慢冷冻和玻璃化冷冻的比较（论文文献综述）
耿丽霞[1]（2015）在《玻璃化冷冻对小鼠胚胎体外发育及印记基因Grb10的影响》文中指出目的:1.建立合适的玻璃化冷冻复苏条件;2.探讨玻璃化冷冻对小鼠胚胎发育的影响;3.探讨玻璃化冷冻对胚胎DNA甲基化水平的影响;4.探讨玻璃化冷冻对胚胎印记基因Grb10转录水平及DNA甲基化的影响;方法:实验共分为三组,自然交配的3.5dpc（days post coitus）体内囊胚为对照组;8-细胞胚经玻璃化冷冻复苏处理发育到囊胚和8-细胞胚直接体外培养至囊胚设置为实验组。其中,自然交配的3.5dpc体内囊胚为体内组,体内8-细胞胚体外培养至囊胚为体外组,8-细胞胚经玻璃化冷冻复苏处理发育至囊胚为冷冻组。通过成功的玻璃化冷冻后,分别计算实验组胚胎的囊胚率和和孵化率;通过免疫荧光技术计算各组的5-Me C（5-Methylcytosine）甲基化的荧光强度;通过选择合适的“相对标准品”,进行一系列5倍稀释后建立相对标准曲线,实时荧光定量PCR检测各组印记基因Grb10转录水平的变化;通过亚硫酸氢盐对甲基化胞嘧啶修饰的结果,对修饰产物进行PCR测序和序列对比,检测单个囊胚中印记基因Grb10 CGI1（Cp G island 1）甲基化修饰的变化。结果:玻璃化冷冻结果显示冷冻组的囊胚率和体外组相比无显着差异,冷冻组的囊胚孵化率显着低于体外组;胚胎免疫荧光结果表明冷冻组的5-Me C荧光强度分别低于体外组和体内组。实时荧光定量PCR检测显示冷冻组中印记基因Grb10的转录水平较体内组和体外组下降,体外组的转录水平与体内组无显着差异;微量亚硫酸氢盐修饰后测序显示冷冻组中印记基因Grb10 CGI1甲基化水平明显降低,而体外组的甲基化水平更低。结论:小鼠胚胎玻璃化冷冻可能降低8-细胞的体外发育及冷冻囊胚的DNA甲基化水平,免疫荧光显示冷冻囊胚的DNA全基因组甲基化水平显着低于体内囊胚。玻璃化冷冻影响印记基因Grb10的转录表达,玻璃化冷冻胚和体外发育胚中印记基因Grb10 CGI1区均呈低甲基化状态,说明印记基因的表达除甲基化控制外,还可能有其他调控因素存在。
李敦高[2]（2012）在《小鼠种质安全保存方法和体系的研究》文中提出本研究利用活体保种、精子冷冻及辅助生殖技术建立了一套安全的综合性保种体系。实验设计以单侧睾丸摘除方法获得ICR、BDF1、C57BL/6J和GFP四种小鼠的附睾精子进行冷冻保存实验,手术后恢复的公鼠继续用于自然繁育。如果无法自然繁育,则将冻融精子用于体外受精（IVF）。如果冻融精子经体外受精仍无法获得后代,则需要借助卵胞质内单精子注射技术（ICSI）进行胚胎构建。以上两种方法还需要通过胚胎移植来获得后代仔鼠。结果单侧睾丸摘除的BDF1、C57BL/6J公鼠可以继续繁育得到后代；对不育的ICR和GFP小鼠的冻融精子实施IVF后,只有ICR小鼠可以得到正常的胚胎和仔鼠;而以C57BL/6J为遗传背景的GFP转基因小鼠,其冻融精子只有采用ICSI技术,才可以得到仔鼠。本文证实了精子冻融小鼠的遗传背景是影响IVF成功与否的关键性因素,同时建立了一种以小鼠精子为主导的综合性保种体系,既可以达到品系保存的目的,又实现了对小鼠品系最大限度的利用。再ICSI技术支撑下,进一步研究慢速冷冻对。ICSI及孤雌激活卵／合子的影响。实验首先对小鼠卵母细胞进行ICSI和孤雌激活,0h、1h、5h后分别进行慢速冷冻保存。复苏后统计卵母细胞／合子的成活率、受精率／激活率和胚胎发育率,并观察细胞骨架和倍型变化。实验发现：ICSI后0h、1h、5h三组间以及孤雌激活0h、1h、5h三组间冷冻存活率均存在显着差异（p<0.05）；ICSI后0h、1h、5h三组存活受精卵中双原核率也有显着差异（p<0.05）,而且孤雌激活1h、5h组双原核率也存在显着差异（p<0.05）。尽管这些组间存在显着差异,但是出现双原核的受精卵或者孤雌卵子囊胚发育率无显着差异。相对于处理5h后冷冻的ICSI卵子和孤雌激活卵子,处理0h和1h后冷冻的ICSI卵子和孤雌激活卵子有更多的不正常倍型的合子,说明过短时间的冷冻前处理可能会导致一些激活卵子形成不正常的倍型。而且实验发现,在ICSI后立刻冷冻的卵子中,复苏的精子头依然能够在卵子中维持正常的受精能力且不影响胚胎早期发育。
张丽[3]（2012）在《Wistar大鼠超排及胚胎冷冻研究》文中研究表明本研究采用10IU/只、20IU/只和30IU/只3种剂量的孕马血清促性腺激素-人绒毛膜促性腺激素（PMSG-HCG）对8-9周龄的Wistar大鼠进行超排处理,收集不同发育时期的胚胎,以探讨Wistar大鼠不i同发育阶段胚胎所需超排试剂的最佳剂量以及采集不同发育期胚胎的方法；收集的Wistar大鼠2-细胞期胚胎和桑葚胚,利用冻存管法,用不同冷冻剂组合（DAP213、SDP0323）进行玻璃化冷冻,比较其冷冻复苏后的胚胎复苏率、移植产仔率,筛选新的胚胎冻存液,用于建立大鼠胚胎冷冻库。结果表明：（1）将8-9周龄的wistar雌鼠60只随机分为三组,分别用PMSG和HCG以不同的处理剂量（10IU,20IU,30IU）进行超排处理,注射HCG的当口与雄性Wistar大鼠1：1合笼、交配,次口早检查阴栓,确认受孕。1.5d采集2-细胞期胚胎,每只平均获得胚胎数分别为（12.1±4.6）、（23.1±10.2）和（24.9±8.2）枚,其中激素剂量为30IU/只时超排效果最好。经统计学t-检验分析,当分别注射20IU/只、30IU/只剂量PMSG和HCG时,均与10IU剂量有显着性差异（P<0.01）；3.5d采集桑葚期胚胎,每只平均获得胚胎数分别为（10.3±5）、（23.7±±17.2）和（17.2±5.9）枚,注射20IU/只剂量的PMSG和HCG时,所获取的桑葚胚（23.7±17.2）明显高于10IU/只剂量组（10.3±5）,经统计学t-检验分析,两者之间有显着性差异（P<0.05）。（2）利用冷冻管方法,冷冻Wistar大鼠2-细胞期胚胎,DAP213冻存液冻存87枚,胚胎复苏后形态正常45枚（51.7%）,移植43枚胚胎,产仔15只（34.9%）；SDP0323冻存液冻存81枚,胚胎复苏后形态正常56枚（69.1%）,移植56枚胚胎,产仔23只（41.1%）；SDP0323冻存液冷冻大鼠2-细胞期胚胎的平均复苏率和平均产仔数均比DAP213冻存液组高；但两种冻存液的胚胎冷冻复苏率和产仔率无统计学差异（P>0.05）。同样方法冷冻Wistar大鼠桑葚胚,DAP2]3冻存液冻存256枚胚胎复苏后形态正常176枚（68.8%）,移植174枚胚胎,产仔32只（19.6%）；SDP0323冻存液冻存214枚,胚胎复苏后形态正常172枚（80.4%）,移植169枚胚胎,产仔32只（21%）。SDP0323冻存液冷冻大鼠桑葚胚的平均复苏率和平均产仔数均比DAP213冻存液组高；但两种冻存液的胚胎冷冻复苏率和产仔率无统计学差异（P>0.05）。两组冷冻试剂组合均可作为对Wistar大鼠2-细胞期胚胎和桑葚胚进行冷冻保存的有效方法,可用于建立大鼠胚胎库。
张丽,谭竹钧,刘牧[4]（2011）在《大鼠胚胎冷冻保存技术及研究进展》文中进行了进一步梳理随着大鼠基因序列测序的完成和基因敲除技术的发展,通过对大鼠进行基因注入和基因敲除后建立的人类疾病模型日渐增多,建立一种完善的大鼠胚胎冷冻保存技术体系保存这些遗传资源至关重要。本综述系统介绍了大鼠胚胎冷冻技术的发展进程及研究现状,并根据其研究现状分别介绍了各类冷冻保护剂的特点及其组合,常用冷冻保存方法的比较及解冻方法;分析了目前大鼠胚胎冷冻保存技术面临的一些难题;介绍了大鼠胚胎冷冻保存技术的应用前景。
徐平,刘丽均,郁丽丽,贾青,高娟,杨博,陈浩杰[5]（2009）在《系统低温生物学技术在实验小鼠资源保存中的建立与应用》文中研究说明目的建立小鼠胚胎与配子冷冻库,以安全、有效地保存小鼠资源。方法选择不同遗传背景（近交系、远交群、免疫缺陷、疾病模型和基因改变等）的实验小鼠,系统进行了超数排卵、体外受精（IVF）率、胚胎与精子的冷冻复苏效果、卵巢冷冻与移植、辅助体外受精等比较研究。结果①小鼠年龄和遗传背景的不同,其超数排卵的结果也不同（P<0.01）。三个日龄段中,28日龄最好,其次为112日龄,56日龄最差;不同遗传背景小鼠的超数排卵结果显示,封闭群和大部分近交系小鼠优于转基因小鼠（P<0.05）,自发性疾病小鼠和基因剔除小鼠的结果最差;②不同品系小鼠的新鲜精子和冻融精子的体外受精率差异有显着性（P<0.05）,特别是C57BL/6J小鼠冻融精子的IVF率（10.3±4.2%）与新鲜精子（89.8±4.8%）相比,差异极显着（P<0.01）;③不同品系小鼠的胚胎复苏率,除MRL/mp小鼠的复苏率略低外,其他小鼠品系均有较高的冷冻胚胎复苏率（58.2%83.9%）,表明,不同遗传背景小鼠之间差异有显着性（P<0.05）,但均可以达到有效保存小鼠资源的目的。④小鼠的遗传背景、年龄等对小鼠精子的冷冻效果都有影响,采用改良的FERTIUP冷冻保护剂和细胞质内单精注射（ICSI）技术可有效提高以C57BL/6J为背景的基因改变小鼠的精子冷冻复苏率。⑤卵巢冷冻保存可以改善雌性小鼠的繁殖困难或不孕。结论小鼠资源的安全保存,除了长期连续繁殖保种外,最好的或最保险的方法是低温保存。通过将胚胎、配子、卵巢等长期保存在液氮（-196℃）中避免遗传性状的改变,并在将来复苏后获得正常的小鼠后代,以用于生物学和医学等研究。
金花子,金庆国,李钟淑,郑东吉,方南洙[6]（2009）在《兔胚胎玻璃化冷冻的研究》文中研究表明探讨用玻璃化冷冻法保存兔胚胎的效果.结果表明,兔早期囊胚在0.5 M海藻糖（93.8%）溶液中的存活率显着高于0.5 M蔗糖组（70.0%,P<0.05）.对照组与不同浓度甘油处理间兔胚胎存活率均差异不显着（P>0.05）.分别用不同浓度乙二醇玻璃化冷冻兔胚胎,解冻回收后正常胚胎数和囊胚孵化率,对照组与10%,20%EG组之间均差异不显着（P>0.05）,但对照组,10%,20%EG组均显着高于30%EG组（P<0.05）.解冻回收后正常胚胎数体内胚胎组（79.4%）显着高于体外胚胎（54.1%,P<0.05）,囊胚孵化率2组之间差异不显着（P>0.05）.缓慢冷冻法与玻璃化冷冻法之间胚胎解冻回收后正常胚胎数和囊胚孵化率均差异不显着（P>0.05）.
周生来,于洋,王维,王禄增,郑志红[7]（2008）在《SD大鼠超排卵及胚胎冷冻方法比较》文中研究表明目的优化超排卵效果及建立大鼠胚胎冷冻方法。方法腹腔注射三种不同剂量PMSG-HCG（15IU/只、20IU/只、25IU/只）超排5周龄SD大鼠,当日与正常雄鼠1:1合笼交配,比较三种激素剂量的超排卵效果。应用输卵管吹卵法收集2-细胞胚胎,采用小鼠胚胎冷冻方法对大鼠胚胎进行冷冻,通过胚胎复苏率比较不同冷冻时间（方法Ⅰ:5min,方法Ⅱ:1min）的冷冻效果。结果采用三种剂量进行超排分别获得13±12.7、31±14.2、41±25.4枚胚胎,其中激素剂量25IU/只超排效果最好;方法Ⅱ在操作简便性上明显优于方法Ⅰ,但冷冻效果无显着性差异（平均复苏率88.3%与85.0%）。采用方法Ⅱ冻存大鼠胚胎总计152枚,复苏后形态正常胚胎共计139枚（91.44%）,培养20min后,对存活胚胎共计105枚（75.53%）进行胚胎移植,产仔39只（37.14%）。结论成功优化大鼠超排及建立大鼠胚胎冷冻方法。
高珊,张建军,薛孝先,张文明,孙井江,孟金萍,黄馨,刘牧[8]（2007）在《胚胎发育期和冷冻保护剂剂量对Nakagata小鼠胚胎冷冻效果的影响》文中研究指明目的利用不同剂量的冷冻保护剂,对ICR和Km小鼠不同发育期的胚胎进行冷冻和解冻实验。探讨Nakagata小鼠胚胎玻璃化冷冻管方法,使用不同剂量的冷冻保护剂等因素对冷冻效果的影响。方法2细胞期胚胎在KSOM微滴培养液内分别培养到2细胞4、细胞和8细胞期胚胎,分别加入50μL,100μL,200μL的DAP213冷冻保护剂,利用Nakagata方法冷冻,解冻以及观测解冻后培养至囊胚期胚胎的冷冻效果。结果冷冻保护剂DAP213剂量和ICR,KM小鼠胚胎不同细胞发育期对冷冻效果具有显着的交互影响（P<0.01）。相对而言,冷冻保护剂剂量对结果的影响（P>0.05）低于胚胎细胞发育期对冷冻效果的影响（P<0.01）。结论冷冻保护剂的剂量和胚胎细胞发育期均会影响冷冻实验的结果。胚胎的细胞发育期对冷冻效果的影响更大。对2细胞期,4细胞期和8细胞期的胚胎进行冷冻。8细胞期胚胎的冷冻效果最好,4细胞期胚胎冷冻效果最差。利用Nakagata冷冻管方法建立小鼠胚胎冷冻库,100μL冷冻保护剂效果较好。不同小鼠的品系也可影响冷冻结果。
徐平[9]（2007）在《实验动物低温生物学和生殖工程技术的发展与应用》文中认为低温生物学（cryobiology）是生物科学的一门新兴分支学科,他是研究低温对生物体所产生的影响及其应用的科学。低温生物学的研究和应用,不仅促进了生物学、医学等基础学科的发展,而且为农业、畜牧业、医药工业及其食品工业等带来了巨大的效益。特别是对保护人类赖以生存的环境,挽救濒危物种,保护生物多样性产生了深远的影响。实验动物是生命科学的重要支撑条件,近年来,实验动物新品系,尤其是小鼠突变系的飞速增加已对现有的动物设施和资源的保存方法提出严峻的挑战。随着低温生物学理论的不断深入及其技术的不断完善,低温生物学技术已被广泛应用于实验动物的生产、遗传资源的保存及新品系开发等领域。无疑,小鼠模型的保存将为21世纪哺乳类遗传学的飞速发展和最终攻克人类目前的疑难疾病创造了有利条件。
徐动,朱淑文,唐峰,肖宇[10]（2007）在《猪卵巢组织玻璃化冷冻保存初步研究》文中认为为了建立一种有效的卵巢组织玻璃化冷冻方法,试验采用乙二醇（EG）+二甲基亚矾（DMSO）作为玻璃化冷冻保护剂,将猪卵巢组织经过不同浓度的平衡液中处理后进行玻璃化冷冻保存。结果表明,经过两步平衡冷冻组卵巢组织中的卵泡形态结构基本正常;提取卵巢组织细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳,检测玻璃化冷冻卵巢组织细胞DNA损伤,各实验组与对照组的结果无显着差异。显示采用EG+DMSO作为玻璃化冷冻保护剂、两步平衡玻璃化冷冻方法可用于猪卵巢组织的冷冻保存,该方法不造成卵巢组织细胞DNA的损伤。
二、实验大鼠、小鼠胚胎的缓慢冷冻和玻璃化冷冻的比较（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、实验大鼠、小鼠胚胎的缓慢冷冻和玻璃化冷冻的比较（论文提纲范文）
（1）玻璃化冷冻对小鼠胚胎体外发育及印记基因Grb10的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分：玻璃化冷冻对小鼠胚胎体外发育的影响 |
| 材料 |
| 1.1 实验标本 |
| 1.2 主要仪器和耗材 |
| 1.3 主要试剂 |
| 方法 |
| 2.1 着床前胚胎的收集 |
| 2.2 玻璃化冷冻及复苏溶液 |
| 2.3 胚胎的冷冻 |
| 2.4 胚胎的复苏 |
| 2.5 胚胎培养 |
| 2.6 胚胎分级 |
| 结果 |
| 3.1 实验组图 |
| 3.2 实验数据 |
| 讨论 |
| 第二部分：玻璃化冷冻对小鼠植入前胚胎基因组DNA甲基化的影响 |
| 材料 |
| 1.1 实验标本 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要试剂的配置 |
| 方法 |
| 2.1 体内胚、体外胚和玻璃化冷冻胚的获取 |
| 2.2 胚胎免疫荧光染色步骤 |
| 2.3 统计学处理 |
| 结果 |
| 3.1 小鼠各阶段胚胎DNA甲基化免疫荧光 |
| 讨论 |
| 第三部分：玻璃化冷冻对小鼠胚胎印记基因Grb10转录水平的影响 |
| 材料 |
| 1.1 实验标本 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要试剂的配置 |
| 方法 |
| 2.1 获取胚胎 |
| 2.2 提取体内组、体外组和玻璃化冷冻组囊胚的RNA |
| 2.3 逆转录合成cDNA |
| 2.4 定量PCR反应 |
| 2.5 统计学处理 |
| 结果 |
| 3.1 实时荧光定量PCR反应 |
| 3.2 电泳选择PCR产物明确条带大小 |
| 3.3 统计结果 |
| 3.4 定量分析结果 |
| 讨论 |
| 第四部分：玻璃化冷冻对小鼠胚胎印记基因Grb10 DNA甲基化的影响 |
| 材料 |
| 1.1 实验标本 |
| 1.2 主要实验仪器 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要试剂配制 |
| 方法 |
| 2.1 获取胚胎 |
| 2.2 单个囊胚的亚硫酸氢盐修饰 |
| 2.3 甲基化引物设计 |
| 2.4 小鼠Grb10甲基化分析的PCR扩增 |
| 结果 |
| 3.1 小鼠Grb10基因CpG岛分析 |
| 3.2 小鼠Grb10基因CGI1甲基化分析 |
| 3.3 统计结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（2）小鼠种质安全保存方法和体系的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 冷冻保存原理 |
| 1.2 冷冻损伤 |
| 1.3 小鼠精子冷冻保存 |
| 1.4 小鼠胚胎冷冻 |
| 1.5 小鼠卵母细胞冷冻保存 |
| 1.6 小鼠胚胎与配子冷冻的应用 |
| 1.7 本刊研究的意义 |
| 2 一种新颖的小鼠保种体系 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 主要试剂 |
| 2.2.3 主要仪器 |
| 2.3 实验设计 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 公鼠单侧睾丸摘除手术 |
| 2.4.2 R18S3精子冷冻液配制方法 |
| 2.4.3 精液的收集与冷冻保存 |
| 2.4.4 单侧睾丸摘除小鼠的自然交配 |
| 2.4.5 冷冻精子的复苏 |
| 2.4.6 冻融精子的体外受精 |
| 2.4.7 小鼠的超排处理及卵子的收集 |
| 2.4.8 冻融精子的卵胞质内注射 |
| 2.4.9 胚胎移植 |
| 2.5 结果 |
| 2.5.1 单侧睾丸摘除公鼠的自然交配 |
| 2.5.2 ICR和GFP小鼠冷冻精子的体外受精 |
| 2.5.3 GFP小鼠冻融精子的显微受精 |
| 2.6 讨论 |
| 3 ICSI及孤雌激活小鼠多卵子的冷冻 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 主要试剂及仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 ICSI用针及拣卵针的制作 |
| 3.3.2 附睾尾精子的收集和冷冻 |
| 3.3.3 小鼠的超排处理及卵子的收集 |
| 3.3.4 冷冻精子的复苏 |
| 3.3.5 ICSI |
| 3.3.6 卵子的孤雌激活 |
| 3.3.7 卵母细胞的慢速程序化冷冻 |
| 3.3.8 冷冻卵母细胞的快速解冻 |
| 3.3.9 免疫组化及激光共聚焦显微观察 |
| 3.4 数据统计 |
| 3.5 结果 |
| 3.5.1 ICSI并培养不同时间和孤雌激活不同时间后冷冻复苏存活率 |
| 3.5.2 冷冻ICSI及孤雌激活卵子复苏5hrs后的倍型 |
| 3.5.3 双原核卵母细胞的囊胚发育率 |
| 3.5.4 孤雌激活后冷冻复苏卵母细胞的倍型及发育率 |
| 3.5.5 ICSI卵子冷冻复苏后纺锤体和核的变化 |
| 3.6 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录A |
| 附录B |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（3）Wistar大鼠超排及胚胎冷冻研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| Catalogue |
| 缩写 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 超排 |
| 1.1.1 超排机理 |
| 1.1.2 超排常用激素 |
| 1.1.3 影响超排效果的因素 |
| 1.1.4 研究现状 |
| 1.2 胚胎冷冻保存 |
| 1.2.1 冷冻机理 |
| 1.2.2 抗冻剂的分类 |
| 1.2.3 玻璃化冷冻 |
| 1.2.4 胚胎解冻 |
| 1.2.5 研究现状及发展前景 |
| 1.3 本论文的研究目的、研究内容 |
| 1.3.1 研究目的 |
| 1.3.2 研究内容 |
| 1.4 课题可行性及创新性 |
| 1.4.1 可行性 |
| 1.4.2 创新性 |
| 第二章 大鼠超排 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 试剂及仪器 |
| 2.1.3 超排处理 |
| 2.1.4 胚胎采集 |
| 2.1.5 体外培养 |
| 2.1.6 统计学方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 大鼠胚胎发育不同时期所处的位置 |
| 2.2.2 不同激素剂量对大鼠超排的效果比较 |
| 2.2.3 体外培养 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 大鼠超排 |
| 2.3.2 大鼠早期胚胎的体内发育与迁移 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 大鼠胚胎冷冻 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 试剂及仪器 |
| 3.1.3 大鼠超排处理及胚胎的准备 |
| 3.1.4 胚胎冷冻 |
| 3.1.5 胚胎复苏 |
| 3.1.6 体外培养 |
| 3.1.7 胚胎移植 |
| 3.1.8 统计学分析 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.1 冷冻胚胎解冻后的体外培养情况 |
| 3.2.2 冷冻胚胎解冻后移植情况 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 玻璃化冷冻 |
| 3.3.2 胚胎移植 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 结论与展望 |
| 4.1 超排 |
| 4.2 胚胎冷冻 |
| 4.3 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
| 附图 |
（4）大鼠胚胎冷冻保存技术及研究进展（论文提纲范文）
| 1 冷冻保护剂 |
| 1.1 低分子量渗透性冷冻保护剂 |
| 1.2 低分子量非渗透性冷冻保护剂 |
| 1.3 大分子物质 |
| 2 常用冷冻方法及比较 |
| 2.1 常规慢速冷冻 |
| 2.2 玻璃化冷冻 |
| 3 解冻方法 |
| 4 研究现状及应用前景 |
| 4.1 研究现状 |
| 4.2 应用前景 |
（5）系统低温生物学技术在实验小鼠资源保存中的建立与应用（论文提纲范文）
| 1 小鼠的超速排卵 |
| 1.1 小鼠年龄对超速排卵的影响 |
| 1.2 遗传背景对超速排卵的影响 |
| 2 小鼠的体外受精 |
| 2.1 新鲜精子的体外受精 |
| 2.2 冻融精子的体外受精 |
| 3 小鼠胚胎的冷冻保存 |
| 4 小鼠精子的冷冻保存 |
| 4.1 遗传背景对小鼠精子冷冻的影响 |
| 4.2 年龄对小鼠精子冷冻的影响 |
| 4.3 小鼠冻融精子与新鲜精子体外受精的比较 |
| 4.4 以C57BL/6小鼠为背景的基因工程小鼠的精子冷冻研究 |
| 5 小鼠卵巢的冷冻保存 |
| 6 小鼠的辅助体外受精技术 |
| 7 结束语 |
（6）兔胚胎玻璃化冷冻的研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 供试动物和超数排卵处理 |
| 1.2 采卵 |
| 1.3 海藻糖、蔗糖、甘油对兔胚胎的毒性实验 |
| 1.4 胚胎冷冻 |
| 1) 缓慢冷冻法 |
| 2) 玻璃化冷冻法 |
| 1.5 胚胎解冻 |
| 1.6 冷冻保护剂的脱除 |
| 1.7 解冻后的胚胎存活鉴定 |
| 1.8 统计处理方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 海藻糖和蔗糖对兔胚胎的影响 |
| 2.2 不同浓度甘油对兔胚胎的影响 |
| 2.3 不同浓度乙二醇对兔胚胎冷冻效果的影响 |
| 2.4 兔体内胚胎与体外胚胎冷冻效果的比较 |
| 2.5 不同冷冻方法对兔胚胎冷冻效果的影响 |
| 3 讨论与结论 |
（7）SD大鼠超排卵及胚胎冷冻方法比较（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂及仪器 |
| 1.3 超数排卵[6, 7] |
| 1.4 2-细胞胚胎的采集 |
| 1.5 胚胎的冷冻 |
| 1.5.1 冻存液的准备 |
| 1.5.2胚胎冷冻程序[7] |
| 1.6 胚胎的复苏 |
| 1.7 胚胎移植 |
| 1.7.1 假孕鼠的制备 |
| 1.7.2 2-细胞胚胎的移植 |
| 1.8 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 超排卵结果 |
| 2.2 不同冷冻时间的结果 |
| 2.3 SD大鼠胚胎冷冻后培养和移植结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 大鼠超数排卵 |
| 3.2 大鼠胚胎冷冻技术 |
（8）胚胎发育期和冷冻保护剂剂量对Nakagata小鼠胚胎冷冻效果的影响（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验条件 |
| 1.3 试剂, 培养液及冷冻液 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.4.1 超数排卵及胚胎的获取: |
| 1.4.2 胚胎的冷冻: |
| 1.4.3 胚胎的解冻: |
| 1.4.4 胚胎解冻后的继续培养: |
| 1.5 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 冷冻保护剂剂量和胚胎发育期对KM小鼠胚胎冷冻结果的影响 |
| 2.2 冷冻保护剂剂量和胚胎细胞发育期对ICR小鼠胚胎冷冻结果的影响 |
| 3 讨论 |
（10）猪卵巢组织玻璃化冷冻保存初步研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 卵巢的来源 |
| 1.2 试剂的配制 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 猪卵巢的收集与前期处理 |
| 1.3.2 猪卵巢组织的玻璃化冷冻实验分3组进行。 |
| 1.3.3 猪卵巢组织的解冻和冷冻保护剂的除去 |
| 1.3.4 卵巢组织的形态学观察 |
| 1.3.5 卵巢组织DNA琼脂糖凝胶电泳 |
| 1.3.6 观察指标 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 卵巢组织的形态学观察 |
| 2.2 DNA电泳结果观察 |
| 3 讨论 |
| 3.1 卵巢组织玻璃化冷冻保存的意义 |
| 3.2 玻璃化冷冻保存的卵巢组织结构观察 |
四、实验大鼠、小鼠胚胎的缓慢冷冻和玻璃化冷冻的比较（论文参考文献）
- [1]玻璃化冷冻对小鼠胚胎体外发育及印记基因Grb10的影响[D]. 耿丽霞. 福建医科大学, 2015(06)
- [2]小鼠种质安全保存方法和体系的研究[D]. 李敦高. 东北林业大学, 2012(01)
- [3]Wistar大鼠超排及胚胎冷冻研究[D]. 张丽. 广东工业大学, 2012(09)
- [4]大鼠胚胎冷冻保存技术及研究进展[J]. 张丽,谭竹钧,刘牧. 黑龙江动物繁殖, 2011(05)
- [5]系统低温生物学技术在实验小鼠资源保存中的建立与应用[J]. 徐平,刘丽均,郁丽丽,贾青,高娟,杨博,陈浩杰. 中国比较医学杂志, 2009(08)
- [6]兔胚胎玻璃化冷冻的研究[J]. 金花子,金庆国,李钟淑,郑东吉,方南洙. 延边大学农学学报, 2009(02)
- [7]SD大鼠超排卵及胚胎冷冻方法比较[J]. 周生来,于洋,王维,王禄增,郑志红. 实验动物与比较医学, 2008(06)
- [8]胚胎发育期和冷冻保护剂剂量对Nakagata小鼠胚胎冷冻效果的影响[J]. 高珊,张建军,薛孝先,张文明,孙井江,孟金萍,黄馨,刘牧. 中国比较医学杂志, 2007(11)
- [9]实验动物低温生物学和生殖工程技术的发展与应用[J]. 徐平. 中国比较医学杂志, 2007(08)
- [10]猪卵巢组织玻璃化冷冻保存初步研究[J]. 徐动,朱淑文,唐峰,肖宇. 上海交通大学学报(农业科学版), 2007(01)