一、大鼠γ-干扰素基因转染大鼠肺泡巨噬细胞的实验研究（论文文献综述）
黎攀[1]（2021）在《白茶对香烟烟雾诱导的慢性阻塞性肺病的作用研究》文中提出慢性阻塞性肺疾病（Chronic obstructive pulmonary,COPD）是一种由于大量接触有害颗粒或气体引起的呼吸道症状和气流受限为特征的疾病,吸烟可以显着增加其患病风险。并且认为COPD的主要发病机制包括炎症反应、氧化应激与蛋白酶过表达。目前从抗氧化和抗炎的天然产物中寻找用于预防与改善COPD等慢性病的药物已成为研究热点。本文通过烟熏法建立小鼠COPD模型,测定肺组织病理学变化和各样品的生化指标,研究白茶提取物对小鼠COPD的改善效果和作用机制。主要研究结果如下:1.对福鼎白毫银针、白牡丹与寿眉提取物进行了主要理化成分与体外抗氧化活性测定。三个白茶提取物的茶多酚、黄酮、咖啡碱与氨基酸含量较高,体外抗氧化活性强。但是三种提取物因活性成分含量与组成的差异,在体外抗氧化方面表现出一定的差异,其中YZ提取物抗氧化活性最高,对DPPH清除率的IC50仅需14.15μg·ml-1。2.试验表明,三种白茶提取物和EGCG均可显着改善COPD小鼠肺泡、肺间质与气管的病理损伤,尤其对抑制炎性浸润和肺气肿效果显着;其次,可显着下调模型组炎症因子IL-6和TNF-α水平。三种白茶提取物对COPD小鼠肺组织病理学与炎症反应的改善效果有所差异,MD与YZ提取物效果最好。3.在安全剂量范围内,白茶提取物和EGCG处理能显着降低COPD小鼠MDA含量与MPO活性,上调SOD活性,调节NO异常,并且呈现出显着的肝保护作用,其可能的机制是上调AMPK磷酸化水平。综上所述,白茶提取物能够明显改善COPD小鼠的氧化应激、炎症反应和调节NO异常。
杜诗涵[2]（2019）在《p38MAPK信号通路介导HO-1表达对LPS攻击大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞模型中线粒体融合蛋白的影响》文中研究说明脓毒症是由宿主对感染的反应失调引起的一种危机生命的器官功能障碍,每年会影响全世界数百万人且病死率高达25%,已成为引起死亡的十大病因之一[1,2]。过度的氧化应激及炎性反应被认为是脓毒症所致多器官功能障碍的重要原因,其中肺脏是脓毒症中最易受损的靶器官之一[3]。而在脓毒症肺损伤所涉及的靶细胞中,肺泡上皮细胞是重要的靶效应细胞,肺泡中性粒细胞（PMN）、肺泡巨噬细胞等炎性细胞会粘附于肺泡上皮细胞表面并释放大量活性氧（ROS）以及其他炎性介质使肺泡上皮细胞受损,从而破坏肺内机械屏障,导致大量炎性因子涌入,进而加重肺损伤[4,5]。线粒体是细胞内重要的细胞器,除了能够产生ATP外,还在细胞程序性死亡的调控、免疫炎性反应、钙信号传递以及脂肪酸氧化中发挥重要作用[6]。同时,线粒体作为一种动态的细胞器,能通过线粒体动力学作用改变其在细胞内的大小、形状、位置和功能,氧自由基作用在线粒体会致使线粒体融合减少,影响线粒体功能,进而会损害细胞的长期生存能力[7]。在哺乳动物中,调节线粒体融合的蛋白包括线粒体融合蛋白1（mitofusin,Mfn1）、线粒体融合蛋白2（mitofusin,Mfn2）和视神经萎缩蛋白1（optic atrophy protein 1,OPA1）,其中Mfn1、2是定位于线粒体外膜的蛋白而OPA1定位于线粒体内膜[8]。研究表明,在培养的细胞和小鼠组织中,融合蛋白的缺失会导致线粒体网络严重断裂,线粒体与线粒体之间的物质交换被终止,线粒体DNA含量显着下降,Mfn1和Mfn2功能的丧失导致线粒体代谢功能改变、膜电位丧失并降低线粒体呼吸功能,敲除OPA1会使线粒体膜电位广泛丧失并减少基础呼吸速率[8,9]。血红素加氧酶-1（HO-1）是一种由ROS和细胞因子诱导的应激反应酶,能够催化血红素降解为一氧化碳、胆绿素和游离铁,在抑制和调节机体组织器官炎症、氧化应激、凋亡和增殖过程中发挥着重要作用[10]。我们前期的研究表明,在LPS攻击大鼠模型中,HO-1上调可促进线粒体融合,但其机制尚不明确[11,12]。p38MAPK作为丝裂原活化蛋白激酶亚族之一是信息转导的纽带,可以被细胞外的炎性刺激等因素激活,激活后的p38MAPK通路可调动机体内源性抗炎能力,诱导细胞HO-1表达,调节细胞衰老、凋亡、细胞炎症及其氧化应激,在减轻急性肺损伤的炎性反应中发挥着重要的作用[13,14]。目前尚无p38MAPK介导HO-1表达对LPS攻击大鼠肺泡II型上皮细胞中线粒体融合影响的相关报道。目的探讨p38分裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）介导血红素加氧酶1（HO-1）表达对脂多糖（LPS）攻击大鼠肺泡II型上皮细胞中线粒体融合的作用。方法将大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞以1x106个/ml密度接种于6孔板。采用随机数字表法分为7组:空白对照组（C组）、LPS攻击模型组（L组）、LPS+CO释放剂CORM-2组（LC组）、LPS+p38MAPK抑制剂SB203580组（LS组）、LPS+DMSO组（LD组）、CORM-2组（CO组）和SB203580组（S组）。C组正常培养细胞;L组给予10μg/ml LPS;LC组于加入LPS前30 min给予CORM-2100μM;LS组和LD组于加入LPS前1 h分别给予SB203580 10μM和0.1%DMSO 100μM;CO组、S组分别加入CORM-2 100μM、SB203580 10μM。细胞孵育24 h后,采用MTT法检测细胞活力、硫代巴比妥酸法测定培养液丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量、黄嘌呤氧化酶法测定培养液（Superoxide Dismutase,SOD）活性,采用ELISA法测定细胞上清液肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）、白介素-6（interleukin-6,IL-6）的水平,采用Western blot法测定p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38MAPK）、血红素加氧酶-1（HO-1）、线粒体融合蛋白1（Mfn1）、线粒体融合蛋白2（Mfn2）和视神经萎缩蛋白1（OPA1）的表达水平。结果与C组、CO组、S组相比,其余各组MDA含量升高,SOD活性降低,TNF-α、IL-6水平升高,细胞活力降低,p-p38和HO-1表达上调,Mfn1、Mfn2、OPA1表达下调（P<0.05）;与L组相比,LC组MDA含量降低,SOD活性升高,TNF-α、IL-6水平降低,细胞活力升高,p-p38、HO-1、Mfn1、Mfn2和OPA1表达上调（P<0.05）,而LS组MDA含量升高,SOD活性降低,TNF-α、IL-6水平升高,细胞活力降低,p-p38、HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1表达下调（P<0.05）;与LC组相比,LS组MDA含量升高,SOD活性降低,TNF-α、IL-6水平升高,细胞活力降低,p-p38、HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1表达下调（P<0.05）。且C组、CO组、S组间,L组和LD组间上述各指标比较差异无统计学意义（P>0.05）,各组间总p38蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论HO-1可促进LPS攻击大鼠肺泡II型上皮细胞中线粒体融合,其机制可能与p38MAPK信号通路有关。
周凤丽,毕筱刚,张天托,黄静[3]（2011）在《INF-γ基因转染肺泡巨噬细胞抗肿瘤活性的研究》文中研究指明背景与目的活化的肺泡巨噬细胞（alveolar macrophage,AM）具有抗肿瘤功能,γ干扰素（interferon-γ,INF-γ）是巨噬细胞的活化因子之一,其与巨噬细胞体外共同培养可增强巨噬细胞的免疫功能。本研究旨在了解人INF-γ基因体外转染肺癌患者的AM后对其抗肿瘤功能的影响。方法经肺泡灌洗获AM,分离纯化,以INF-γ基因转染AM,以RT-PCR方法和ELISA方法检测人INF-γ基因的成功转染;分别检测AM产生TNF-α、NO、IL-1的水平及AM杀伤L1210细胞的活性。结果 RT-PCR方法和ELISA方法均显示人INF-γ基因已成功转染AM;经人INF-γ基因转染后,肺癌患者AM产生TNF-α、NO、IL-1的水平较对照组明显升高（P<0.05）;AM杀伤L1210细胞的活性较对照组明显增强（P<0.05）。结论 INF-γ基因体外转染肺癌患者的AM,能使AM的抗肿瘤活性明显增强。
李新春[4]（2010）在《基质金属蛋白酶12在放射性肺损伤组织异常重建和肺纤维化启动中的作用及治疗靶点的探索》文中提出目的和意义:放射性肺纤维化是放射性损伤所引起的肺组织无效重建的终级阶段,其详细的发生机理至今仍未完全揭示。在放射性肺损伤的早期,MMP-12酶活性升高与肺纤维化的启动过程似乎存在特定的关系。本研究拟探索放射性肺损伤后,MMP-12在肺组织异常重建中的作用以及肺重建与肺纤维化启动之间的内在联系,阐明早期启动放射性肺纤维化的机制;并应用吡啡尼酮（Pirfenidone）研究其对放射性肺损伤后肺重建的影响与作用。方法:首先在放射性肺损伤早期,采用广谱基因芯片技术筛选差异表达的相关基因,对经过60Coγ射线照射的大鼠肺组织,分别应用明胶酶谱分析、Western Blot和免疫组织化学染色检测MMP-12的酶活性和蛋白表达变化;组织特殊染色法观察肺泡壁弹力纤维降解情况,透射电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞与肺间质细胞间的“信号交流”（cross talking）现象,ELISA检测肺组织纤维化相关因子TGF-β、IL-1β、TNF-α的含量,免疫组化检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达情况。原代分离大鼠肺泡Ⅱ型细胞（AT-Ⅱ）、间质细胞（MA和Fb）,酶谱分析法检测细胞上清中MMP-12的酶活性;人肺成纤维细胞（HLF）经照射和不同剂量的吡啡尼酮处理后,应用免疫细胞化学、Western Blot、四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法和酶谱分析法分别检测HLF中TGF-β1、α-SMA、TNF-α、IL-1β、IFN-γ表达变化和细胞异常增生的程度以及细胞上清中MMP-12的酶活性。结果:（1）MMP-12酶活性在照射后1周开始增高,至照射后4周时有所下降;肺泡壁基底膜弹力纤维照射后1周开始出现降解断裂,4周时最为严重;肺组织TGF-β1含量和α-SMA免疫组化阳性信号在14周内随照后时间延长而逐渐升高。电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞与肺间质细胞间出现“信号交流”现象。（2）在动物水平上,吡啡尼酮能明显减轻照射后肺组织的实变程度和渗出性炎症,显着抑制照射引起的MMP-12蛋白表达和酶活性升高,并且可明显抑制照射后基底膜弹力纤维的降解断裂、肺实质细胞与间质细胞的“Crosstalking”生物反应以及由此引起的纤维化相关因子的释放,拮抗肺成纤维细胞向肌成纤维细胞方向转化。（3）在细胞水平上,吡啡尼酮可抑制照射促进HLF表达TGF-β1、α-SMA、TNF-α、IL-1β、IFN-γ以及细胞增生的作用,使上清中MMP-12的酶活性减弱,且此种抑制作用和给药剂量呈明显的依赖关系。吡啡尼酮还可明显下调照射后肺实质细胞（AT-Ⅱ）和间质细胞（AM和Fb）上清中MMP-12的酶活性。结论:在放射性肺损伤早期,激活的巨噬细胞表达MMP-12,后者酶活性升高,使得肺泡壁基底膜弹力纤维降解断裂,肺组织开始重建,ECM间隙形成,进而导致肺泡上皮细胞与肺泡隔间质细胞相互接触,引发这些细胞间的cross talking生物反应,导致某些纤维化相关因子的释放,刺激肺泡隔成纤维细胞活化、增生,向周围的ECM间隙游走、迁移并向MFb方向转化,合成分泌过多的Ⅳ、Ⅰ和Ⅲ胶原,造成细胞外基质过度沉积,肺组织重建无效,最终形成肺纤维化病变。MMP-12有望成为放射性肺纤维化机理研究的一个新靶点,而吡啡尼酮通过对MMP-12酶活性的抑制,有可能成为一种新的对抗和防治放射性肺纤维化的药物,本研究为临床有效防治放射性肺损伤及肺纤维化提供了新的理论依据和措施。
栾嘉[5]（2008）在《第三军医大学学报2008年第30卷总目次》文中研究表明
高宏生[6]（2008）在《矽肺纤维化生物活性介质调控网络研究》文中研究说明矽肺是最为严重的一种职业病之一,是由于长期吸入大量含有游离二氧化硅粉尘所引起的一种不可逆转的渐进性加重的肺间质纤维化疾病。引起矽肺的主要职业有武警黄金水电部队的开矿挖掘作业,地方各行业如矿山开采、冶金工业中的原料破碎、陶瓷工业的原料加工,这些职业均可导致不同程度的肺纤维化。矽肺患病率逐年增多,造成直接和间接经济损失巨大,是危害最严重的职业病之一,而且已经成为重大社会公共卫生问题。国内外学者对矽肺纤维化的单个细胞因子作用虽已取得了一定的研究进展,但其系统网络调控机制尚未阐明。目的确定矽肺纤维化相关的生物活性介质,构建生物活性介质调控网络及其基因调控网络,以及二者整合网络,以此系统阐明矽肺纤维化的网络调控机制。方法本文主要应用系统生物学的方法构建生物活性介质调控网络。1.生物活性介质的确定。采用RevMan4.2进行meta分析,对研究的偏倚进行漏斗图、异质性、敏感性分析后进而确定相关活性介质。2.初始调控网络的构建。利用meta分析后数据,通过三次样条插值,采用微分方程模型并应用最小二乘法求解加权矩阵,构建活性介质调控网络。3.大鼠矽肺模型及实验后调控网络构建。应用气管暴露法注入二氧化硅粉尘悬液或生理盐水建立大鼠矽肺模型或对照模型。随机将Wistar大鼠分为矽尘组和对照组,每组再分为第1d,第3d,第7d,第14d,第21d,第28d共6个时间点,每个时间点分别取8只大鼠处死,收集相应血清和肺组织后系统检测相关生物活性介质。采用天狼猩红染色法结合偏振光显微镜观察肺组织胶原变化,并用图像分析系统定量分析Ⅰ、Ⅲ型胶原面积比;采用ELISA法系统测定血清中活性介质NF-κB、IL-1β、IL-10、TNF-α、INF-γ、TGF-β1、GM-CSF的含量;利用硝酸还原酶法测定NO含量。通过系统检测数据应用相关系数模型和微分方程模型进一步构建调控网络。4.干扰实验对调控网络的校正。同样应用气管暴露法建立大鼠矽肺模型,随机将32只大鼠分为TNF-α干扰组和矽尘组,每组再分为第7d和第14d两个时间点,每个时间点取8只大鼠并检测以上相同活性介质,通过比较两组之间各指标的差异校正调控网络。5.基因调控网络实验确证和扩充。造模后第14d用Trizol提取染矽尘组和对照组中肺组织总RNA,通过Illumina大鼠全基因表达芯片的检测,结合Diffscore差异分值筛选差异表达基因。通过KEGG、GO、DAVID等数据库平台,应用功能富集分析方法以及Cluster、TreeView等工具建立相关细胞因子基因聚类树,并利用差异表达基因相关系数矩阵构建基因调控网络,整合活性介质和基因调控网络,扩充和完善生物活性介质调控网络。结果1.meta分析后肺纤维化相关活性介质为TNF-α、TGF-β1、IFN-γ、MCP-1、IL-4、IL-6、IL-18、MMP-9、IL-10、IL-1β、IL-5、IL-8、IGF-1、GM-CSF、MMP-2、EGF。其中肺组织中TNF-α随时间的变化并不是直线升高,而是呈波浪性升高。肺组织、巨噬细胞、血清活性介质TNF-α各时点变化并不一致,其中巨噬细胞在第1天变化比其余两者更为明显,肺组织除第1天外各时点变化具有显着性差异,血清在各个时点变化均较肺组织表达弱一些。2.当权值阈值为2σ时,肺纤维化活性介质调控网络中重要节点为:IFN-γ、IL-10、IL-1β、IL-18、IL-6、IGF-1、GM-CSF、TGF-β1、TNF-α;非重要节点的活性介质为IL-4、IL-5、IL-8、MCP-1、MMP-2、MMP-9、EGF。当权值阈值为3σ时,肺纤维化活性介质调控网络中重要的节点变为:IFN-γ、IL-10、IL-1β、GM-CSF、TGF-β1、TNF-α;非重要节点的活性介质为IL-18、IL-6、IGF-1、IL-4、IL-5、IL-8、MCP-1、MMP-2、MMP-9、EGF。3.肺组织天狼猩红染色显微镜及图像分析仪观察表明第21天、第28天矽肺模型是成功的。实验组与对照组比较,血清中NF-κB和NO各时间点（除第21天NO外）表达具有统计学意义,动态表达比趋势较为一致。TGF-β1第21天、第28天表达增加,而IFN-γ第21天、第28天表达有降低趋势。TNF-α表达比呈先降低后增高趋势,但整体上与对照组相比没有统计学意义。IL-1β、IL-10、GM-CSF不同时间点动态表达比均大于1,前两者先升高后降低,后者呈波浪性升高。4.调控网络中度大于等于5的节点介质为IFN-γ、GM-CSF、TGF-β1、TNF-α;度小于5的节点为IL-10、IL-1β、NF-κB、NO、COLⅠ、COLⅢ。TNF-α可溶性受体干扰实验是可行的,该受体能够抑制矽尘诱导的大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的增加,抑制外周血清中NO、IL-1β、TGF-β1、NF-κB的蛋白表达。原调控网络中同TNF-α相关联的介质可能还包括COL I、GM-CSF等介质。5.矽肺纤维化血清中通过功能富集分类得出相关细胞因子基因共有29个,其调控网络中“度”大于5的关键基因为CCL7、GRN、IL-18、SFTPD、SPN、SPP1、TNF-α、TNFRSF。结论矽尘诱发机体活性介质的变化通过网络状态调控肺纤维化的形成。16种生物活性介质（TGF-β1,IFN-γ,MCP-1, IL-4, IL-6,IL-18,MMP-9, TNF-α,IL-10,IL-1β,IL-5,IL-8, IGF-1, GM-CSF, MMP-2, EGF）可能参与肺纤维化的调控,且具有一定的时空变化规律。时间趋势上活性介质的含量不是呈直线性,而是呈波浪性升高或降低趋势,各时点变化并不一致。空间表现上活性介质在细胞中出现最早,血清中出现最晚;各时点在肺组织中表达最强,血清中表达较弱。肺纤维化生物活性介质调控网络中重要节点介质为:IFN-γ、IL-10、IL-1β、GM-CSF、TGF-β1、TNF-α、NF-κB、NO;非重要节点为IL-18、IL-6、IGF-1、IL-4、IL-5、IL-8、MCP-1、MMP-2、MMP-9、EGF。在肺纤维化活性介质调控网络中,NO和NF-κB是一个启动中枢,而TNF-α、TGF-β1既担当启动子又担当致纤维化调控网络的中间传递子,GM-CSF、IL-1β、IFN-γ呈现级联瀑布放大或抑制网络效应。在网络效应活性介质促进和抑制功能不平衡的条件下形成肺纤维。
刁瑞英[7]（2008）在《Ⅳ型胶原基因高表达在放射性肺损伤组织重塑中的作用及肺纤维化防治研究》文中认为目的放射性肺纤维化是肺组织遭受放射损伤后继发引起的肺泡结构无效重建的终末阶段,其详细的启动机制至今未明。在放射性肺损伤早期,Ⅳ型胶原表达增加与肺纤维化启动过程似有一定的联系。本研究拟探讨放射性肺损伤后,Ⅳ型胶原、MMPs及TIMPs参与肺损伤重建过程以及与早期肺纤维化启动之间的内在联系,阐明放射性肺纤维化启动的机制;并应用PPAR-γ激动剂Rosiglitazone和Pioglitazone探讨其对放射性肺损伤早期肺重塑的干预。方法采用广谱基因芯片筛选放射性肺损伤早期相关基因;通过实时荧光定量PCR和免疫组织化学方法检测Ⅳ型胶原、MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2在mRNA和蛋白水平的表达;应用MTT、ELISA、明胶酶谱分析和免疫细胞化学检测60Coγ射线、照后大鼠血清、巨噬细胞条件培养液（CMAM）促肺成纤维细胞（Fb）增殖和表达IV型胶原和MMP-9蛋白的能力,以及Pioglitazone对60Coγ射线照射和TGF-β1促Fb增殖的拮抗作用;原代分离经照射和Rosiglitazone处理的大鼠肺泡Ⅱ型细胞（AT-Ⅱ）、间质细胞（MA和Fb）;收集肺泡灌洗液（BALF）中的AM;应用酶谱分析法、RT-PCR、免疫组化和Western Blot分别检测肺组织中IV型胶原、MMP-9、MMP-2、α-SMA和TIMP-1的表达变化。结果（1）基因芯片筛选发现:C57小鼠肺内IV型胶原基因在照后1～4w呈现明显高表达;（2）实时定量PCR基因检测:Wistar大鼠Ⅳ型胶原表达于照射后1w时升高,2w时下降;MMP-2在2w时达高峰,与IV型胶原成相反变化趋势;MMP-9呈明显的升高、下降、再升高趋势,与IV型胶原变化趋势相同;TIMP-1表达较低,各时间点之间无明显差异;TIMP-2呈现升高、降低、升高趋势,与MMP-2表达相反;（3）免疫组化-图像分析:肺组织Ⅳ型胶原含量于1w即明显增加,2w开始下降;MMP-2含量变化呈现由低至高,变化趋势与IV型胶原呈相反关系;MMP-9变化趋势同IV型胶原,但程度明显高于后者;TIMP-1于2w时轻度升高,与MMP-9趋势相反。（4）1～7Gy照射能促进肺Fb增生;5和7Gy照射能促进Fb合成MMP-9,但不能促进IV型胶原合成;照后大鼠血清和CMAM不但能促进Fb增生和MMP-9合成,也能促进Fb合成和释放IV型胶原;受照后1w大鼠肺组织出现IV型胶原沉积;Ⅳ胶原可促AM合成分泌具有活性的明胶酶;（5）在细胞水平上,Pioglitazone呈剂量依赖性抑制照射对Fb的促增殖作用,抑制其转化为肌成纤维细胞（MFb）,并诱导Fb凋亡,细胞培养上清中明胶酶活性增强;在动物水平上,Rosiglitazone能明显减轻照后肺组织的实变程度,抑制肺Fb增殖和转化,下调IV型胶原和TIMP-1表达,上调MMP-2和MMP-9表达。结论放射性肺损伤的结局是形成肺纤维化,在纤维化形成之前,受损的肺组织经历了一个损伤-修复-损伤的无效性重建阶段,由于此过程伴随着细胞生长因子和其它生物活性物质参与,使得此种修复失去应有的意义反而对肺组织造成进一步的损害,启动了肺纤维化的发生。Ⅳ型胶原、MMP-2和MMP-9及其抑制物TIMPs参与放射性肺损伤早期的无效重建过程,MMP-2和MMP-9具有降解IV型胶原作用;IV型胶原降解障碍与肺纤维化启动有一定关系;AM因其能释放多种肺损伤相关因子而在早期肺重塑中具有重要作用。PPARγ有望成为放射性肺纤维化机理研究的一个新靶点,而其人工配体噻唑烷二酮类药物-Rosiglitazone和Pioglitazone有可能成为一种新的对抗和防治放射性肺纤维化的药物,本探索为临床有效防治放射性肺损伤及肺纤维化提供了新的理论依据和措施
胡江文[8]（2006）在《TGF-β1基因转染联合BMC/MSCs诱导嵌合体在异种心脏移植免疫耐受中作用的实验研究》文中研究指明背景心脏移植现已成为一种行之有效的治疗终末期心脏病的手段,随之而来的是供体脏器的匮乏,异种心脏移植被认为可能是一种极有希望的解决途径。相对于同种心脏移植,远缘异种移植遭受更加严重的、不可逆转的排斥反应。免疫抑制药物方面的进展已经极大的促进了移植学,然而伴随着长期的免疫抑制治疗,有幸长期生存的受者会出现严重的并发症和移植物的失活。为促进移植物的长期存活、改善受者的生活质量、减少移植术后单位时间的治疗费用,关键的环节可能是诱导免疫耐受。而随着移植免疫学的进一步研究和发展,诱导免疫耐受已经成为器官移植研究的主要目标。TGF-β1是一种普遍存在的细胞因子,是关系到细胞生长和增殖的至关重要的活性蛋白,在器官移植免疫中起重要的作用。嵌合体是诱导供体特异性免疫耐受的最有效方法之一。在本课题中,我们克隆了大鼠TGF-β1基因,构建了携带目的基因的重组逆转录病毒载体并且在豚鼠骨髓间充质干细胞中稳定表达。通过多次输注豚鼠骨髓细胞和间充质干细胞建立了一种稳定的异基因大鼠嵌合体模型。探讨联合应用嵌合体和TGF-β1逆转录病毒基因治疗是否能够在大鼠中诱导出异种心脏移植的免疫耐受,据此来评估TGF-β1基因和嵌合体在异种移植中的应用前景。方法:1、分离大鼠脾细胞,经PHA（10μg/ml）活化24h后,提取细胞总RNA,根据GenBank公布的大鼠TGF-β1 cDNA序列设计并合成一对引物P1、P2,采用RT-PCR技术克隆大鼠TGF-β1基因,将RT-PCR产物亚克隆到pMD18-T载体经PCR鉴定阳性克隆,并将PCR产物用PstⅠ单酶切鉴定和重组克隆载体进行DNA测序鉴定。2、以测序验证的pMD18-T/TGF-β1为模板,分别利用P3、P6;P5、P4二对引物PCR扩增出目的基因片段PCR1和PCR2;再以PCR1、PCR2为模板,利用P3、P4
冷怀明[9]（2002）在《《第三军医大学学报》2002年第24卷主题词索引》文中指出
冷怀明[10]（2002）在《第三军医大学学报2002年第24卷总目次》文中认为
二、大鼠γ-干扰素基因转染大鼠肺泡巨噬细胞的实验研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、大鼠γ-干扰素基因转染大鼠肺泡巨噬细胞的实验研究（论文提纲范文）
（1）白茶对香烟烟雾诱导的慢性阻塞性肺病的作用研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩写、符号清单和术语表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 白茶的生物活性研究进展 |
| 1.1.1 白茶的主要功能性成分 |
| 1.1.2 白茶的抗氧化能力 |
| 1.1.3 白茶的防癌与抗癌活性 |
| 1.1.4 白茶减轻体重与改善代谢综合征 |
| 1.1.5 白茶对肝脏的保护作用 |
| 1.1.6 白茶对神经的保护作用 |
| 1.2 COPD研究进展 |
| 1.2.1 COPD概况 |
| 1.2.2 COPD发病机制 |
| 1.2.3 COPD现有的治疗方法 |
| 1.3 天然产物改善COPD的研究现状 |
| 1.4 茶改善COPD的研究现状 |
| 1.5 研究的内容与技术路线 |
| 1.5.1 研究内容 |
| 1.5.2 技术路线 |
| 第二章 白茶提取物的理化成分分析及体外抗氧化活性研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料及仪器 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 |
| 2.2.3 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 白茶提取物的制备 |
| 2.3.2 白茶提取物理化成分的测定 |
| 2.3.3 白茶提取物体外抗氧化能力的测定 |
| 2.3.5 数据统计方法 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 白茶提取物的主要理化成分 |
| 2.4.2 白茶提取物的体外抗氧化活性 |
| 2.5 讨论及小结 |
| 2.5.1 讨论 |
| 2.5.2 小结 |
| 第三章 小鼠烟雾造模及其对肺病理与炎症的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料及仪器 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 |
| 3.2.2 实验动物 |
| 3.2.3 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 小鼠烟雾造模及给药 |
| 3.3.2 样本采集与处理 |
| 3.3.3 肺组织的HE染色实验 |
| 3.3.4 IL-6和TNF-α酶联免疫的测定 |
| 3.3.5 数据统计方法 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 白茶提取物对小鼠生存质量的影响 |
| 3.4.2 白茶提取物对COPD小鼠肺组织病理学的影响 |
| 3.4.3 白茶提取物对COPD小鼠炎症因子水平的影响 |
| 3.5 讨论及小结 |
| 3.5.1 讨论 |
| 3.5.2 小结 |
| 第四章 白茶提取物对COPD小鼠氧化应激与肝毒性的改善效果及机制 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料及仪器 |
| 4.2.1 实验材料与试剂 |
| 4.2.2 实验动物 |
| 4.2.3 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 小鼠烟雾造模及给药 |
| 4.3.2 样本采集及处理 |
| 4.3.3 MDA含量的测定 |
| 4.3.4 SOD活性的测定 |
| 4.3.5 NO含量的测定 |
| 4.3.6 MPO活性的测定 |
| 4.3.7 谷丙和谷草转氨酶活性的测定 |
| 4.3.8 磷酸化AMPK含量的测定 |
| 4.3.9 数据统计方法 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 白茶提取物对COPD小鼠抗氧化能力的影响 |
| 4.4.2 白茶提取物对COPD小鼠NO异常的影响 |
| 4.4.3 白茶提取物对COPD小鼠AMPK磷酸化水平的影响 |
| 4.4.4 白茶提取物对COPD小鼠肝毒性的影响 |
| 4.5 讨论与小结 |
| 4.5.1 讨论 |
| 4.5.2 小结 |
| 第五章 总结与展望 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（2）p38MAPK信号通路介导HO-1表达对LPS攻击大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞模型中线粒体融合蛋白的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 1 对象和方法 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验药品与试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 试剂和溶液配制 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 指标检测 |
| 1.7 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞活力比较 |
| 2.2 各组细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-6(IL-6)浓度比较 |
| 2.3 各组细胞丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性比较 |
| 2.4 各组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞中血红素加氧酶和线粒体融合蛋白比较 |
| 2.5 各组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞中p38、p-p38 蛋白比较 |
| 3 讨论 |
| 3.1 模型细胞的选择 |
| 3.2 LPS致大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞RLE-6TN损伤模型的建立 |
| 3.3 线粒体融合 |
| 3.4 HO-1的内源性保护作用 |
| 3.5 p38 丝裂原活化蛋白激酶 |
| 小结 |
| 结论 |
| 论文创新点 |
| 论文不足之处 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 HO-1/CO在肺脏疾病中的作用研究现状 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）INF-γ基因转染肺泡巨噬细胞抗肿瘤活性的研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 AM的收集 |
| 1.3 将人INF-γCDNA构建于真核表达质粒, 获表达人INF-γ基因的真核表达载体 |
| 1.4 将纯化的AM与人IFN-γ基因转染液共同孵化 |
| 1.5 |
| 1.6 上清液检测 |
| 1.6.1 INF-γ的活性测定 |
| 1.6.2 TNF-α含量测定 |
| 1.6.3 NO含量测定 |
| 1.6.4 IL-1含量测定 |
| 1.7 AM杀伤活性的检测 |
| 1.8 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 AM活力测定 |
| 2.2 RT-PCR检测结果 |
| 2.3 INF-γ基因转染后巨噬细胞培养上清液中INF-γ活性的检测结果 |
| 2.4 INF-γ基因转染后巨噬细胞培养上清液中TNF-α、NO和IL-1水平的检测结果 |
| 2.5 INF-γ基因转染后AM对L1210细胞的杀伤活性的检测结果 |
| 3 讨论 |
（4）基质金属蛋白酶12在放射性肺损伤组织异常重建和肺纤维化启动中的作用及治疗靶点的探索（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 主要仪器设备 |
| 第一部分 MMP-12 在放射性肺损伤早期组织异常重建中的作用探讨 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 吡啡尼酮对放射性肺损伤早期组织重塑的防治作用探讨 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 吡啡尼酮对照射后肺泡Ⅱ型细胞和肺泡隔间质细胞的作用研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录1 个人简历和在学期间发表的相关论文目录 |
| 附录2 文献综述 |
（6）矽肺纤维化生物活性介质调控网络研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪 论 |
| 1.1 国内外研究现状 |
| 1.1.1 矽肺纤维化基础的生物学研究 |
| 1.1.2 数据整合和系统检测是构建调控网络的两个重要手段 |
| 1.1.3 多因子联合研究以及相关疾病调控研究 |
| 1.2 目前研究中存在的问题及研究假设 |
| 1.3 研究目的 |
| 1.3.1 矽肺纤维化生物活性介质的确定 |
| 1.3.2 矽肺纤维化生物活性介质调控网络的构建 |
| 1.3.3 矽肺纤维化生物活性介质及其基因调控网络的整合 |
| 1.4 研究意义 |
| 1.4.1 矽肺纤维化meta分析介质的确定意义 |
| 1.4.2 矽肺纤维化调控网络的构建意义 |
| 1.4.3 矽肺纤维化调控网络干扰实验的校正意义 |
| 1.4.4 矽肺纤维化网络调控的系统整合意义 |
| 1.5 研究内容 |
| 1.5.1 矽肺纤维化生物活性介质的确定 |
| 1.5.2 矽肺纤维化生物活性介质的变化规律 |
| 1.5.3 矽肺纤维化活性介质调控网络构建 |
| 1.5.4 矽肺纤维化生物活性介质及其基因调控网络的整合研究 |
| 1.6 研究方法及工作流程 |
| 1.7 预期研究成果 |
| 1.7.1 矽肺纤维化活性介质的确定及其数据集的建立 |
| 1.7.2 矽肺纤维化生物活性介质调控网络的构建 |
| 1.7.3 矽肺纤维化生物活性介质及其基因整合网络的构建 |
| 1.8 本文组织结构 |
| 第二章 肺纤维化生物活性介质确定 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 资料与方法 |
| 2.2.1 研究目的及文献收集范围 |
| 2.2.2 资料检索 |
| 2.2.3 文献选择标准 |
| 2.2.4 研究的纳入 |
| 2.2.5 质量控制 |
| 2.2.6 统计学分析 |
| 2.2.7 meta分析结果森林图表示 |
| 2.2.8 敏感性分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 TNF-α检索结果 |
| 2.3.2 造模后不同时点不同组分TNF-α的meta分析及偏倚判定 |
| 2.3.3 不同时点肺组织TNF-α变化的meta分析 |
| 2.3.4 肺纤维化TNF-α不同时空变化的meta分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 肺纤维化meta分析质量评价 |
| 2.4.2 肺纤维化TNF-α时空变化meta分析过程评价 |
| 2.4.3 肺纤维化TNF-α时空变化差异分析 |
| 2.5 肺纤维化相关活性介质的确定 |
| 2.5.1 研究对象 |
| 2.5.2 文献检索 |
| 2.5.3 质量控制 |
| 2.5.4 meta分析方法 |
| 2.5.5 meta分析结果 |
| 2.6 小结 |
| 第三章 肺纤维化生物活性介质调控网络的构建 |
| 3.1 前言 |
| 3.1.1 数据库分析平台研究 |
| 3.1.2 分子调控网络的结构特性研究 |
| 3.1.3 整体框架下认识复杂分子调控过程的研究 |
| 3.1.4 研究方法 |
| 3.1.5 生物分子调控网络的应用及存在的问题 |
| 3.2 对象与方法 |
| 3.2.1 研究对象 |
| 3.2.2 肺纤维化相关活性介质数据预处理 |
| 3.2.3 调控网络分析思想 |
| 3.2.4 肺纤维化活性介质时间表达矩阵 |
| 3.2.5 三次样条插值 |
| 3.2.6 微分方程模型 |
| 3.2.7 根据Wij建立加权矩阵绘制活性介质网络拓扑图 |
| 3.2.8 调控网络的MATLAB软件实现 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 肺纤维化相关活性介质的确定及编号 |
| 3.3.2 肺纤维化不同时点相关活性介质数据标准化 |
| 3.3.3 肺纤维化相关活性介质三次样条插值后拟合Y结果 |
| 3.3.4 肺纤维化相关活性介质最小二乘法加权矩阵W结果 |
| 3.3.5 肺纤维化相关活性介质网络模型的加权矩阵标化值 |
| 3.3.6 肺纤维化相关活性介质网络的调控作用 |
| 3.3.7 肺纤维化相关活性介质网络模型阈值提高后的加权矩阵标化值 |
| 3.3.8 肺纤维化相关活性介质网络调控的修正 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 肺纤维化相关活性介质数据预处理的正确性 |
| 3.4.2 肺纤维化生物活性介质之间的相互作用 |
| 3.4.3 权值阈值的确定及阈值变化对调控网络的影响 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 肺纤维化生物活性介质调控网络实验确证 |
| 4.1 前言 |
| 4.1.1 动物模型实验生物活性介质的选择 |
| 4.1.2 生物活性介质检测时间点的选择 |
| 4.1.3 生物活性介质调控网络的实验验证 |
| 4.1.4 干扰活性介质及干扰时间点的选择 |
| 4.1.5 通过动物干扰实验进一步修正调控网络 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 动物模型的建立 |
| 4.2.2 生物样本的采集 |
| 4.2.3 血清中活性介质的ELISA法测定 |
| 4.2.4 血清中NO介质的测定 |
| 4.2.5 普通石蜡切片的制作 |
| 4.2.6 天狼猩红染色、图像采集与分析 |
| 4.2.7 数据处理及统计学分析 |
| 4.2.8 调控网络分析思想 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 大体肺组织标本肉眼观 |
| 4.3.2 Ⅰ、Ⅲ型胶原天狼猩红染色的偏振光显微镜观察结果 |
| 4.3.3 矽肺动物模型各个时间点实验组和对照组活性介质比较 |
| 4.3.4 矽肺纤维化不同时间点活性介质之间的相关矩阵 |
| 4.3.5 矽肺动物模型纤维化活性介质调控网络 |
| 4.3.6 TNF-α可溶性受体干扰后调控网络校正 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 矽肺纤维化模型及胶原动态变化比较 |
| 4.4.2 矽肺纤维化模型血清中生物活性介质动态变化比较 |
| 4.4.3 矽肺纤维化过程中活性介质的网络调控 |
| 4.4.4 干扰实验的影响以及对调控网络的校正 |
| 4.4.5 动物实验系统检测、调控网络构建的研究 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 生物活性介质基因调控网络实验确证和扩充 |
| 5.1 前言 |
| 5.1.1 基因表达芯片研究的意义 |
| 5.1.2 基因表达芯片制备及杂交 |
| 5.1.3 数据的预处理和归一化 |
| 5.1.4 基因表达矩阵 |
| 5.1.5 差异表达基因的筛选 |
| 5.1.6 基因调控网络 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 实验动物分组情况及样本量的确定 |
| 5.2.2 气管暴露法建立大鼠矽肺模型 |
| 5.2.3 生物样本的采集 |
| 5.2.4 总RNA的提取 |
| 5.2.5 基因表达谱芯片杂交及分析 |
| 5.2.6 基因芯片的数据处理 |
| 5.2.7 基因调控网络的构建 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 差异表达基因的筛选 |
| 5.3.2 矽肺中的基因功能聚类 |
| 5.3.3 矽肺中的可能发生改变的生物学通路 |
| 5.3.4 矽肺纤维化调控网络的构建 |
| 5.3.5 矽肺纤维化细胞因子及其基因调控网络的整合 |
| 5.4 讨论 |
| 5.4.1 矽肺纤维化活性介质差异表达基因的筛选及聚类分析 |
| 5.4.2 矽肺纤维化相关细胞因子基因调控网络的构建 |
| 5.4.3 矽肺纤维化活性介质及基因调控网络整合分析 |
| 5.4.4 对构建的调控网络完整性和准确性的评估 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 总结、创新与展望 |
| 6.1 总结 |
| 6.2 创新 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 附录1 检索策略 |
| 附录2 肺纤维化部分活性介质结果分析及其漏斗图分析 |
| 综述 |
| 代表性论文 |
| 攻读博士期间从事的科学研究工作与成果 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
（7）Ⅳ型胶原基因高表达在放射性肺损伤组织重塑中的作用及肺纤维化防治研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 Ⅳ型胶原、MMPs 和TIMPs 在放射性肺损伤重建中的作用探讨 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 放射性肺损伤早期肺组织重建机制的探讨 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 ~(60)Co γ射线照射对肺泡II 型细胞和肺泡隔间质细胞的生物学效应 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第四部分 PPAR-γ激动剂对照射所致HLF 增生和蛋白表达的抑制作用 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第五部分 PPAR-γ激动剂对放射性肺损伤的保护作用 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 简历 |
| 综述 肺间质纤维细胞增生与胶原合成调控机制的研究进展 |
| 发表论着 |
（8）TGF-β1基因转染联合BMC/MSCs诱导嵌合体在异种心脏移植免疫耐受中作用的实验研究（论文提纲范文）
| 中 文 摘 要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 |
| 第二部分 |
| 第三部分 |
| 第四部分 |
| 结论 |
| 缩略词表 |
| 综述 |
| 发表论文 |
| 致谢 |
| 中文详细摘要 |
四、大鼠γ-干扰素基因转染大鼠肺泡巨噬细胞的实验研究（论文参考文献）
- [1]白茶对香烟烟雾诱导的慢性阻塞性肺病的作用研究[D]. 黎攀. 浙江大学, 2021(01)
- [2]p38MAPK信号通路介导HO-1表达对LPS攻击大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞模型中线粒体融合蛋白的影响[D]. 杜诗涵. 天津医科大学, 2019(02)
- [3]INF-γ基因转染肺泡巨噬细胞抗肿瘤活性的研究[J]. 周凤丽,毕筱刚,张天托,黄静. 中国肺癌杂志, 2011(05)
- [4]基质金属蛋白酶12在放射性肺损伤组织异常重建和肺纤维化启动中的作用及治疗靶点的探索[D]. 李新春. 中国人民解放军军事医学科学院, 2010(04)
- [5]第三军医大学学报2008年第30卷总目次[J]. 栾嘉. 第三军医大学学报, 2008(24)
- [6]矽肺纤维化生物活性介质调控网络研究[D]. 高宏生. 中国人民解放军军事医学科学院, 2008(11)
- [7]Ⅳ型胶原基因高表达在放射性肺损伤组织重塑中的作用及肺纤维化防治研究[D]. 刁瑞英. 中国人民解放军军事医学科学院, 2008(11)
- [8]TGF-β1基因转染联合BMC/MSCs诱导嵌合体在异种心脏移植免疫耐受中作用的实验研究[D]. 胡江文. 苏州大学, 2006(12)
- [9]《第三军医大学学报》2002年第24卷主题词索引[J]. 冷怀明. 第三军医大学学报, 2002(12)
- [10]第三军医大学学报2002年第24卷总目次[J]. 冷怀明. 第三军医大学学报, 2002(12)