一、肝素钠对骨髓基质细胞增殖及成骨转化的影响（论文文献综述）
刘青武[1]（2021）在《回阳生肌汤和鸡血藤对慢性皮肤溃疡愈合过程中MSCs趋化和迁移功能的调节作用研究》文中研究表明背景:慢性皮肤溃疡是糖尿病、放化疗、周围血管病等常见的并发症,是外科常见病及多发病,迁延难愈,愈后常复发。尤其是长期不愈合,呈现疮面清冷,脓液稀薄,疮周紫黯不温的症状,在中医属于阴证疮疡的疮面,治疗难度最大。近年来,以间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells,MSCs）为主的细胞治疗在慢性创面修复中取得较大进展,但植入MSCs修复溃疡的治疗方法,存在细胞来源不稳定、操作复杂、不良反应及费用昂贵等不足,临床使用和推广困难。慢性皮肤溃疡属于中医“疮疡”的范畴,其中慢性皮肤溃疡阴证具有“肾精虚衰”的特点。北京中医医院皮外科奠基人赵炳南教授及其传人王玉章、吕培文教授以益肾填精、活血通络的回阳生肌汤治疗慢性皮肤溃疡阴证安全有效。鸡血藤作为回阳生肌汤活血通络的主要成分,其促进骨髓造血功能的作用受到广泛报道,但鸡血藤用于创面修复的研究较少。干细胞具有中医“肾精”的属性,因此提出回阳生肌汤通过益肾填精、活血通络促进内源性骨髓MSCs的增殖,提升其趋化和迁移能力,达到化生气血、生肌长肉,而促进慢性皮肤溃疡创面愈合的假说。研究将通过体内和体外实验加以验证,探索回阳生肌汤及其主要成分鸡血藤治疗慢性皮肤溃疡阴证的作用和靶点。目的:研究回阳生肌汤及其主要成分鸡血藤促进慢性皮肤溃疡愈合过程中,对MSCs增殖、趋化和迁移功能的调节作用及其机制,为临床中医血管外科防治慢性皮肤溃疡阴证提供实验基础和理论依据。方法:1.回阳生肌汤和鸡血藤水提物入血成分分析:BALB/C小鼠灌胃给药,制备含药血清,采用高效液相色谱串联质谱技术（Ultra-performance liquid chromatography combined with tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS）对回阳生肌汤和鸡血藤水提物的入血成分进行分析;2.体内实验:（1）db/db糖尿病小鼠伤口模型:采用db/db糖尿病小鼠背部正中部位全厚层皮肤打孔的方法制备糖尿病伤口模型,并使用回阳生肌汤干预;采用数码相机拍照记录创面大小,分析创面愈合率;采用苏木精-伊红染色（Hematoxylin-Eosin staining,HE）染色观察创面组织学形态;提取小鼠全骨髓细胞,采用显微镜下计数方法观察骨髓细胞数量;流式细胞术检测骨髓中干细胞标志物CD29、CD44、干细胞表面抗原（Stem cell antigen 1,Sca-1）、CD117阳性细胞比例;免疫荧光染色检测创面中MSCs标志物CD29、CD271阳性细胞数量;炎症因子芯片检测创面中白介素3（Interleukin 3,IL-3）、IL-6、IL-13等炎症因子表达;（2）骨髓抑制大鼠伤口模型:采用尾静脉注射（8mg/kg）的多柔比星联合背部正中部位全厚层皮肤打孔的方法,制备骨髓抑制大鼠伤口模型,并使用回阳生肌汤和鸡血藤水提物进行干预;采用数码相机拍照记录创面大小,分析创面愈合率;称量胸腺及脾脏重量,计算胸腺指数和脾指数;采用血常规检测观察外周血白细胞数量;酶联免疫吸附法（ELISA）检测了大鼠血清中基质细胞衍生因子-1（Stromal cell-derived factor-1,SDF-1）和粒细胞集落刺激因子（Granulocyte-Colony Stimulating Factor,G-CSF）的浓度;HE及Masson染色并观察创面组织学形态和胶原含量;免疫荧光染色检测创面中CD34、CD133阳性细胞数量;流式细胞术检测骨髓及外周血中CD29、CD90、CD34、CD133阳性细胞比例;采用骨髓细胞贴壁培养法提取和纯化各组药物干预后大鼠的BMSCs;EdU染色检测BMSCs的增殖能力;划痕和Transwell试验检测BMSCs的迁移和趋化能力;Western Blot法检测SDF-1和趋化因子受体4（CXC chemokine receptor 4,CXCR4）蛋白的相对表达量。3.体外实验:采用全骨髓细胞贴壁培养法纯化大鼠BMSCs;流式细胞术、成脂和成骨分化鉴定BMSCs;使用H2O2刺激BMSCs制作氧化应激BMSCs模型,并使用回阳生肌汤提取物和鸡血藤水提物干预;采用细胞增殖毒性检测试剂盒-8（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测BMSCs的增殖活力;划痕试验检测BMSCs的迁移能力;Transwell趋化试验检测BMSCs的趋化能力;Western Blot法检测BMSCs中SDF-1和CXCR4蛋白表达水平。结果:1.回阳生肌汤和鸡血藤水提物入血成分分析:（1）对回阳生肌汤的入血成分进行分析,共得到19个化合物,包括黄酮类,萜类,皂苷类及糖类,含量较高者分别为刺芒柄花苷、汉黄芩素、马钱素、（6αR,11αR）-10-羟基-3,9-二甲氧基紫檀烷、16-氧乙酰茯苓酸甲酯、莫诺苷、核黄素、β-谷甾醇、奥刀拉亭-7-O-β-D-葡萄糖苷、芒柄花黄素、毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷,主要来自鸡血藤、牛膝、苍术、山茱萸、黄芪、茯苓;（2）对鸡血藤水提物的入血成分分析,共得到8个化合物,均为黄酮类化合物,含量由高到低分别为芒柄花黄素、阿夫罗摩辛、异甘草素、大豆素、3,7-二羟基-6-甲氧基二氢黄酮醇、密花豆素、樱黄素、卡亚宁。2.体内实验（1）db/db糖尿病小鼠伤口模型:整体药效观察显示,与模型组比较,回阳生肌汤组小鼠创面愈合率升高;在创面中,与模型组相比,创面肉芽组织新生增多,MSCs 标志物 CD29、CD271 阳性细胞数量增多,IL-3、IL-6、IL-15、Fas 配体（Fas ligand,Fas L）表达升高,IL-13、肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α）、细胞间黏附分子-1（Intercellular Cell Adhesion Molecule-1,ICAM-1）、嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotaxin）、趋化因子LIX/CXCL5表达降低;在骨髓中,与模型组比较,回阳生肌汤组小鼠骨髓细胞数量增加,骨髓中MSCs标志物CD29、CD44、Sca-1阳性细胞比例升高。（2）骨髓抑制大鼠伤口模型:整体药效观察显示,与模型组比较,回阳生肌汤组和鸡血藤水提物可提高模型大鼠的创面愈合率,升高胸腺指数和脾指数;在创面中,与模型组比较,可见回阳生肌汤组和鸡血藤水提物组大鼠中创面炎性细胞数量减少,胶原合成增加,干细胞标志物CD34、CD133阳性细胞数量增多;在骨髓中,CD29、CD90、CD34、CD133阳性细胞比例增加;在外周血中,与模型组比较,回阳生肌汤和鸡血藤水提物组血清中SDF-1和G-CSF的浓度升高,白细胞数量增加,CD29、CD90、CD34、CD133阳性细胞比例增多;分离提取药物干预后的原代大鼠BMSCs,与模型组比较,可见回阳生肌汤和鸡血藤水提物组BMSCs增殖细胞数量增加,迁移能力和趋化能力增强,SDF-1和CXCR4蛋白表达增多。3.体外实验:大鼠BMSCs细胞呈梭形,呈旋涡状、席纹状排列,折光性良好;第三代细胞MSCs标志物CD29、CD44阳性细胞比例分别99.9%和97.8%,造血干细胞表面标志物CD45表达率为0.47%。氧化应激状态下的原代大鼠BMSCs的增殖活力降低,趋化和迁移能力下降;与模型组比较,回阳生肌汤和鸡血藤水提物组BMSCs增殖活力升高,迁移和趋化能力增强,SDF-1和CXCR4蛋白表达升高。结论:1.回阳生肌汤和鸡血藤入血成分主要为黄酮类化合物,提示黄酮类化合物在回阳生肌汤和鸡血藤的药效中发挥了重要作用;2.回阳生肌汤干预db/db糖尿病小鼠伤口模型,能够加速创面愈合,并促进小鼠骨髓BMSCs的增殖,增加创面干细胞的数量,调控创面的炎症反应,促进肉芽组织新生;3.回阳生肌汤和鸡血藤水提物干预骨髓抑制大鼠伤口模型,能够促进大鼠血清SDF-1和G-CSF的分泌,且激活模型大鼠BMSCs SDF-1/CXCR4信号轴,促进骨髓干细胞的增殖、迁移和趋化能力,并动员干细胞进入外周血中,增加创面干细胞的数量,促进胶原合成,加速创面的修复;4.回阳生肌汤和鸡血藤水提物在体外作用于大鼠BMSCs,能够激活SDF-1/CXCR4信号轴,保护氧化损伤的BMSCs的活性,提升氧化损伤状态下BMSCs的迁移和趋化能力。
谢辉[2]（2019）在《新型多孔钽金属的制备及在股骨头坏死治疗中的应用》文中研究表明股骨头坏死是骨科尚未解决的难题,发病率逐年提高,致残率较高;尤其当股骨头坏死病变进展到中晚期,伴随股骨头软骨下微骨折及骨量的缺失,将导致股骨头塌陷,退变将不可逆。在保留股骨头手术方案中,骨科医生需要对即将失去完整结构、塌陷的股骨头进行修复及重建。传统经典的方法是采用自体带或不带血运髂骨或游离腓骨进行移植修复,但仍存在修复后生物力学强度不够及分布不均,再次塌陷不可避免。随着生物组织工程技术进步及新型生物材料研究的发展,有望为股骨头坏死后保髋治疗提供新的方式。基于组织工程技术三大要素,理想的骨组织工程支架材料应该具有以下特征:（1）具备稳定化学特征及良好的生物相容性,与组织体液无炎症反应:（2）支架材料具有与骨结构类似的力学性能,从而避免应力遮挡,特别是在弹性模量上与相应骨组织（0.01～30 GPa）越接近越好,同时具有足够的生物力学强度;（3）在空间结构上与骨组织类似,可为种子细胞提供有利的生长空间和物质交换场所。目前常用医用生物金属材料面临弹性模量高、孔隙率低、接触面摩擦系数低、易出现应力遮挡,造成宿主骨相应骨折及内植入物失效等问题。多孔钽金属（Porous tantalum）具有类似骨小梁结构,平均孔径在400～600μm之间,整体孔隙率为75%～85%,弹性模量与人体皮质骨结构相近,能更好地减少植入后应力遮挡,有利于骨重建及塑形。其相关产品在临床得到广泛应用,并取得了良好临床效果。但多孔钽金属材料制备技术被垄断,应用价格高昂,因而实现多孔钽金属国产化势在必行。本研究以多孔碳化硅材料为支架,应用化学气相沉积技术,制备新型多孔钽金属材料,并进行初步的生物性评价;开展了多孔钽金属材料复合骨髓基质干细胞修复骨坏死的实验研究,并在临床对股骨头坏死患者进行治疗,综合评价新型多孔钽金属的生物学特性及在股骨头坏死治疗中的临床疗效,具体内容如下:1.以多孔碳化硅为支架材料应用化学气相沉积（Chemical Vapor Deposition,CVD）技术将钽金属沉积在其表面形成国产新型多孔钽金属材料,采用超景深三维数字显微系统观察碳化硅支架材料在涂层前后表面金属形态特征,及扫描电镜和EDX能谱分析确定钽金属涂层厚度及钽元素能谱分析证实新型多孔钽金属制备工艺,成功制备出新型国产多孔钽金属。制备过程证实了最佳的氢气流量为150mL/min,最佳基体反应温度为900℃,沉积时间为10小时。采用化学气象沉积技术能够将钽金属均匀沉积到多孔碳化硅支架孔隙表面,涂层与碳化硅基体的结合力良好。新型多孔钽金属不仅具备理想的孔隙率率及三维互通的网状结构,有具有与骨组织相匹配的力学性能。2.通过原代提取兔骨髓基质干细胞（BMSCs）进行分离、培养,应用流式细胞检测仪检测细胞表面CD45、CD44及CD34蛋白,进行BMSCs特异性抗原鉴定。分别将BMSCs与钽金属浸提液、正常培养基及多孔钽金属材料共培养7天,分别观察1、3、5、7天细胞生长、增殖曲线,发现1、3、5天三组间无明显差异,7天时钽金属共培养组高于其他两组,具有统计学意义。采用MTT法测定三组间细胞生长、增殖情况,反映多孔钽金属具有良好的细胞相容性。应用扫描电镜观察BMSCs在多孔钽金属支架材料上粘附、生长及增值情况,联合培养至第7d,相邻细胞间突触交织融合,粘附爬行相互连接,多孔钽金属表面完全被细胞所覆盖,并可见多孔钽金属孔隙内部充满细胞,并分泌基质覆盖在材料表面。另外将多孔钽切割制作成直径为0.5cm、长0.7cm大小的圆片状,植入兔背部筋膜及肌肉处,观察多孔钽植入后与周围结缔组织纤维相容性。12周后,发现多孔钽被结缔组织包围,局部没有红肿、破溃、流脓等炎症反应和肿瘤形成。Van Gieson染色结果表明,皮下植入的多孔钽完全整合到结缔组织中,无免疫排斥反应。证实了新型多孔钽支架材料具有良好体内体外生物相容性,进而可为下一步进行骨植入提供可靠的理论基础。3.针对BMSCs具有向成骨细胞转化的潜力和特性,体外培养骨髓基质干细胞结合多孔钽形成复合体,植入兔股骨坏死区域,观察其改善成骨以及骨修复的情况。首先通过体外实验我们采用骨髓基质干细胞分别与多孔碳化硅、多孔钛金属和自制新型多孔钽金属共同培养,7天培养后与多孔钽支架组的细胞增殖均高于Ti合金和SiC支架组（P<0.05）;通过细胞的成骨诱导,并经茜素红染色和碱性磷酸酶钴钙法染色进一步验证了所提取、培养的细胞符合干细胞具有成骨分化的特性;将骨髓基质干细胞与多孔钽支架复合培养,细胞数量随着复合培养的天数也不断增加。两周后,可荧光定量PCR检测到多孔钽金属复合培养组的骨钙素、骨桥蛋白表达增高,证实了多孔钽金属具有一定促进骨生成作用;在体内实验中,制备成激素型骨坏死模型并多孔钽金属及复合细胞后植入修复骨坏死,进行植入物周围骨组织免疫组织化学染色,结果显示两组间骨组织内均有不同程度的BMP-2和VEGF表达,在骨髓、微血管周围及周围骨组织内可见黄褐色颗粒,其中多孔钽金属联合BMSCs组深染,表达较明显,12周时强烈表达,多孔钽金属联合BMSCs组明显高于对照组,有明显差异,具有统计学意义（P<0.05）;硬组织切片结果显示在单纯植入多孔钽12周后,多孔钽的孔隙几乎全部被新生的类骨质所填充,多孔钽联合BMSCs共培养组,可见再生的骨小梁（红色）在多孔钽的内部。通过此次试验再次证明了新型多孔钽金属具有良好的生物相容性,符合骨植入材料的基本要求;动物试验结果表明多孔钽金属联合骨髓基质干细胞修复骨坏死取得了良好的效果,可为治疗中晚期骨坏死提供一些思路和选择。4.应用新型多孔钽棒复合骨髓基质干细胞联合带血管蒂髂骨瓣转移方法对青壮年股骨头缺血性坏死病人进行了保留股骨头的手术治疗,在明确骨髓基质干细胞具有促成骨作用,多孔钽金属棒具有诱导骨生长及生物力学支撑的情况下,研究联合带血管蒂髂骨瓣转移治疗股骨头坏死,对中晚期的年轻股骨头坏死病人进行了治疗,取得了满意的疗效,研究结果发现新型多孔钽棒复合骨髓基质干细胞联合带血管蒂髂骨瓣转移有效的清除了股骨头内坏死骨,促进了股骨头内新骨再生,提供了可靠的血供及生物力学支撑,预防塌陷的进一步发生,并且不增加手术的并发症。
杜若林[3]（2019）在《生物可吸收PLLA血管内支架对内膜修复和血管重构的影响及其机理研究》文中研究说明经皮冠状动脉介入治疗是心血管疾病治疗的重要手段,生物可吸收支架可短期支撑血管,有效防止支架植入后血管急性闭塞和降低再狭窄发生率。生物可吸收支架植入后逐渐被血管吸收分解,力学刺激逐渐消失,这一复杂过程可能造成血管发生不同于传统金属药物支架的反应,影响局部细胞的表型和功能,对该支架的评价应区别于传统的药物洗脱金属支架。目前鲜有研究结合生物可吸收支架的特点提出植入后功能性健康内皮的修复和促进血管重构等的相关评价指标,包括生物可吸收支架的在体降解及其对细胞的影响、胞外基质变化等,这些问题也是有效解决生物可吸收支架临床应用中支架再狭窄、血栓及局部炎症的关键。因此,本文重点关注支架植入后的内膜修复和血管重构过程,并探讨其机理,旨在为生物可吸收支架的综合评价提供新的可参考依据。以大鼠腹主动脉为动物模型,分析了左旋聚乳酸（Poly-L-lactic acid,PLLA）支架植入后内皮功能、血管的重建、支架降解与血管细胞的反应,并探究了降解产物乳酸对平滑肌细胞表型的影响,获得的主要研究结果如下:（1）PLLA血管内支架植入后的再内皮化与内皮功能恢复。PLLA支架植入后4周再内皮化基本完成,随后CD31在管腔层细胞逐渐形成稳定表达,新生内膜具有更好的内皮屏障功能。支架植入早期新生内膜发生了CD31hiEMCNhi内皮亚型变化,随后这种内皮亚型的表达逐渐减弱。血管的炎症水平先升高后降低。总之,PLLA支架植入后内膜修复是一个变化的过程,能够获得具有低炎症、内皮化良好且屏障功能较优的新生内膜。（2）PLLA血管内支架植入后时间依赖的内膜增生与血管修复重建。PLLA支架植入后管腔直径先减小后增加,内膜增生程度先增加后减少,同时伴随增生内膜中细胞表型的变化。PLLA支架植入后胶原纤维先增加后减少而弹性纤维先减少后增加,均在24周出现变化的转折,植入后24周开始血管经历正向重建过程,48周更接近正常血管。综上,PLLA支架植入后新生内膜增生程度先增加后降低,血管在24周开始正向重构,48周后血管逐步趋向于恢复正常。（3）PLLA血管内支架在体降解过程与伴随的血管细胞表型变化。PLLA支架植入后24周出现显着降解,支架丝轮廓变小,出现降解碎片。力学响应因子MGF与BMP2伴随支架降解先增加后减少。血管细胞发生表型转化,RUNX2表达先增多且入核发挥转录因子功能,随后随时间增加表达减少。总之,PLLA支架植入后24周出现显着降解,血管细胞经历了从正常到成骨转化随后转化程度降低的变化过程。（4）PLLA降解产物乳酸促进血管平滑肌细胞发生成骨表型转化。PLLA降解产物乳酸增加细胞对环境力学变化的响应,增加细胞力学响应因子MGF的表达和对基底硬度的响应。乳酸可促进细胞由平滑肌表型向成骨表型转化,促进靠近内膜和外膜区域的血管中膜平滑肌细胞中RUNX2的表达和入核。乳酸可以通过单羧酸转运蛋白1进入血管细胞并升高细胞内乳酸脱氢酶B的水平,促进细胞的溶酶体数量升高。但在血管损伤同时存在时,血管优先对损伤进行反应,支架植入后血管反应复杂,乳酸并不一定占主要地位。总之,PLLA降解产物乳酸能够促进血管平滑肌细胞的成骨表型转化。综上所述,PLLA支架植入后血管修复重建匹配支架的降解进程,PLLA支架植入1周主要为炎症反应,4周内膜增生严重,12周内皮化完全,在这一过程中获得具有内皮化良好且屏障功能较优的新生内膜。而PLLA支架植入后血管增生程度先增加后降低,PLLA支架在24周出现显着降解,开始正向重建,48周血管已经发生了正向的修复,在整个修复过程血管细胞发生了表型转化。PLLA降解产物乳酸能刺激细胞发生成骨表型转化,支架植入极晚期存在血管钙化的风险。本研究从动物模型入手详细评估了PLLA支架植入后的血管内膜修复和血管重建过程,为生物可吸收支架的临床评价提供更多可参考依据,同时也为支架的药物涂层设计提供更多理论基础。
肖伯莲[4]（2019）在《富血小板血浆联合高位头颈开窗植骨支撑术治疗围塌陷期股骨头坏死的疗效观察及其相关实验研究》文中研究指明目的:1.评估在股骨头坏死围塌陷期中,富血小板血浆联合高位头颈开窗植骨支撑术的临床疗效。2.对大鼠骨髓间充质干细胞进行离体培养,观察富血小板血浆联合骨碎补总黄酮对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化增殖的影响。方法:1.临床研究:回顾性分析2016.6-2018.03在山东省临沂市人民医院骨外科收治的非创伤性股骨头坏死患者50例,通过纳入及排除标准,将25例25髋行富血小板血浆联合高位头颈开窗植骨支撑术的患者归为实验组,将25例25髋单纯行高位头颈开窗植骨支撑术患者归为对照组,随访时间周期为21个月,在随访中将术前和术后3、6、12月及末次随访的髋关节Harris评分、患者影像学改变、末次Harris评分的优良率。记录患者术前和术后第1、5、7、14天的疼痛评分、观察术后引流量、手术后患者患肢肿胀疼痛程度。并观察患者术前和术后炎性指标及手术切口愈合等级情况进行统计学分析,查看有无统计学意义。2.实验研究:采用密度梯度离心法和细胞贴壁法分离法,对 SD大鼠进行骨髓间充质干细胞的体外传代培养与增殖,待传至第3代后,后对骨髓间充质细胞进行鉴定,然后将培养好的骨髓间充质干细胞分为两部分,每部分各分组（对照组:不做特殊处理、A组:在培养基中加入0.5ml富血小板血浆,B组:加入0.5ml 10mg/L骨碎补总黄体酮,C组:加入0.5 ml富血小板血浆和0.5ml 10mg/L骨碎补总黄体酮）第一部分按上述分组加入不同的培养基培养,于37℃、5%CO2培养至1d,3d,7d,10d,并用CCK-8测定法查看各组细胞间的增殖活性。另一部分仍按上述分组加入相应的培养基及加入成骨诱导药物连续培养2周,用茜素红染色分析成骨结果。结果:1.临床部分:两组随访时间均为（16.50±2.46）个月,无失访及中途退组患者。（1）两组患者术后末次随访Harris评分均明显高于术前,差异具有统计学意义（P<0.05）,且观察组末次随访的Harris评分（82.76±2.03）高于对照组（78.20 ±2.40）,差异具有统计学意义（P=0.00）。（2）两组术后末次随访的VAS评分均低于术前差异具有统计学意义（P<0.05）,观察组术后2周随访的VAS评分（2.32±0.69）低于对照组（4.16±0.80）,差异具有统计学意义（P=0.04）。（3）观察组的优良率（95.00%）和改善率（75.00%）均显着高于对照组优良率（65%）和改善率（56.00%）,差异具有统计学意义（P<0.05）。（4）观察组的术后引流量（165.90±25.37）低于对照组（200.50±25.40）,差异具有统计学意义（P=0.00）。（5）两组患者术后均未见切口不愈合、感染、截骨处不愈合、静脉血栓形成等并发症。2.实验部分:第一部分将骨髓间充质干细胞培养3代后运用CD44、CD29、CD45进行细胞学鉴定。其中CD44、CD29呈阳性,阳性率在75%左右。CD45呈阴性。分组培养后第一部分运用CCK-8检测经过各组诱导促进骨髓间充质干细胞的增殖活性发现PRP联合骨碎补总黄酮一组增殖活性最强,PRP组其次,骨碎补总黄酮第三。第二部分诱导成骨细胞运用茜素红染色观察结果同上,使用PRP联合骨碎补总黄酮一组成骨细胞数量最多,PRP次之,骨碎补总黄酮第三,对照组最少。结论:1.富血小板血浆联合高位头颈开窗植骨术治疗围塌陷期股骨头坏死患者的临床短期疗效优于单纯采用高位头颈开窗植骨支撑术的患者,由此说明富血小板与保髋术式结合用来治疗围塌陷期股骨头坏死具有较高的临床效果。2.在加快促进骨髓间充质细胞的生长方面,富血小板血浆联合骨碎补总黄酮具有协同作用。两者结合还可促进诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞转化,两者结合能够共同促进骨髓间充质细胞的增殖及促进成骨细胞分化,且两者结合作用要高于PRP组或骨碎补总黄酮组。就单一因素来讲,PRP、骨碎补总黄酮均可以促进骨髓间充质干细胞增殖、及骨髓间充质干细胞向成骨细胞的转化增殖,从单一因素来讲,PRP有利于促进骨髓间充质干细胞增殖及其向成骨细胞转化。
纪保超[5]（2018）在《基于NF-κB及RANKL-RANK-TRAF6信号通路探究异甘草素对骨关节炎的作用及机制》文中研究表明目的:骨关节炎是一种进展性的以关节软骨退变为主要特征的关节疾患,它的预防,诊断及治疗给世界社会经济医疗保健带来重大负担。即使这样,仍然没有理想的专门针对骨关节炎的治疗方法,患者最终只能选择人工关节置换,这种4级骨科大手术带来的创伤及并发症使一部分高龄患者只能望而却步。目前的治疗药物仅能暂时缓解膝关节疼痛,并不能阻止或减缓骨关节的退变。因此目前迫切需要我们更深入的了解骨关节炎的发病机制,找到一种有效的预防或治疗骨关节炎的方法。本研究旨在研究（1）异甘草素对骨关节炎软骨细胞中NF-κB通路及降解因子的影响。（2）异甘草素对早期骨关节炎软骨下骨中RANKL-RANK-TRAF6信号通路及TGF-β1的影响。（3）基于RANKL-RANK-TRAF6信号通路探究异甘草素对早期骨关节炎软骨下骨异常血管形成的影响。方法:（1）异甘草素对骨关节炎软骨细胞中NF-κB通路及降解因子的影响。1.诱导ATDC细胞系向软骨细胞分化:小鼠前软骨细胞株,来源于鼠畸胎瘤的ATDC5细胞系由南京科百生物技术有限公司提供。分别在诱导培养基诱导第0天,7天,14天,21天进行1%阿尔辛蓝染色及通过RT-q PCR测定软骨细胞内Ⅱ型胶原及Ⅹ型胶原的表达量,以确定最佳诱导时间。2.CCK-8及PE-Annexin V/7-ADD双荧光标记流式细胞分析评估异甘草素对IL-1β干预后的ATDC软骨样细胞的活性影响:此时分为两组,一组测定异甘草素单独对ATDC软骨样细胞的活性影响,根据加入异甘草素的浓度分为6组（0μmol/l,2.5μmol/l,5μmol/l,10μmol/l,20μmol/l,40,μmol/l）,每组每个点设定3个复孔,培养48h后收集细胞进行CCK-8检测及双荧光标记流式细胞分析。另一组测定异甘草素对IL-1β干预后的ATDC软骨样细胞的活性影响,设定为空白对照组（无异甘草素及IL-1β）,IL-1β干预组（10ng/ml）,及不同浓度的异甘草素治疗组（10ng/ml IL-1β+2.5μmol/l异甘草素;10ng/ml IL-1β+5μmol/l异甘草素;10ng/ml IL-1β+10μmol/l异甘草素;10ng/ml IL-1β+20μmol/l异甘草素;10ng/ml IL-1β+40μmol/l异甘草素）。先在软骨细胞中加入不同浓度的异甘草素培养1小时后再加入10ng/ml IL-1β,继续培养48小时后收集细胞进行CCK-8检测及PE-Annexin V/7-ADD双荧光标记流式细胞分析。3.异甘草素抑制IL-1β干预ATDC软骨样细胞后的降解反应:使用TRIzol提取各组细胞总RNA用于Real-time PCR分析,测定软骨细胞降解标记物Ⅱ型胶原（COLⅡ）,环氧合酶-2（COX-2）,基质金属蛋白酶13（MMP-13）。4.异甘草素对NF-κB通路的影响:使用蛋白免疫印迹法（Western Blot）测定软骨细胞降解过程相关标记物,软骨细胞凋亡相关标记物Bcl-2,Bax,caspase-3,cleaved-caspase-3,caspase-9,cleaved-caspase-9,NF-κB通路相关标记物NF-κB-p65,磷酸化的p65（phospho-p65）。（2）异甘草素对骨关节炎早期软骨下骨中RANKL-RANK-TRAF6信号通路及TGF-β1的影响。1.建立C57BL/6J小鼠骨关节炎模型:C57BL/6J小鼠购于北京维通利华实验动物技术有限公司,预实验分5个组来选定最佳治疗剂量,假手术组,模型组,腹腔注射异甘草素治疗组-低剂量（10mg/kg）,异甘草素治疗组-中剂量（20mg/kg）,异甘草素治疗组-高剂量（40mg/kg）。后根据预实验结果选定最佳实验剂量40mg/kg。采用腹腔注射氯胺酮+安定+阿托品各一支混合稀释至10ml（0.1ml/10g）麻醉小鼠,麻醉起效后,右膝关节部备皮消毒,铺单,在显微镜直视下切断前交叉韧带,术后连续3天给予皮下注射氨苄青霉素,1次/天。假手术组只切开关节囊,不切断前叉韧带,余处理与手术组相同。2.评估造模后各组间小鼠膝关节软骨的各项指标:各组小鼠于术后30天及60天处死,标本脱钙包埋后先用HE染色及番红-固绿染色,观察软骨的退变情况及蛋白聚糖的丢失情况。同时,最后我们用国际骨关节炎协会（Osteoarthritis Research Society International）改良版评分来对关节软骨的破坏程度给予定量分析。我们采用免疫组织荧光染色及免疫组织化学染色测定软骨中的标记物lubricin,Ⅹ型胶原（Col X）,基质金属蛋白酶13（MMP-l3）。3.评估造模后各组间小鼠膝关节软骨下骨的各项指标,探究异甘草素抑制TRAP+破骨细胞的机制:我们将样本置于三维Micro-CT（Sky Scan1176）扫描,扫描后的数据运用专用软件进行三维重建及分析（NRecon v1.6,CTAn v1.9和CTVol v2.0）,分析各组之间小鼠软骨下骨骨重建的相关指标:包括a.骨体积在同体积中所占有的量（BV/TV）;b.骨小梁模式因子（Tb.pf）;c.软骨下骨骨小梁的厚度（SBP Th.）。我们通过免疫组织化学染色评估了TRAP+的破骨细胞,Osterix,TGF-β1通路p Smad2/3,通过免疫组织荧光染色测定各组的RANKL,TRAF6,Nestin+的骨髓间充质干细胞（MSCs）。此外,通过Elisa试剂盒检测小鼠体循环内破骨细胞相关因子的表达。（3）基于RANKL-RANK-TRAF6信号通路探究异甘草素对软骨下骨异常血管形成的影响。1.使用三维Micro-CT扫面造影剂灌注后的样本来分析异甘草素对小鼠软骨下骨异常血管形成的影响,包括血管的体积及数量。2.异甘草素对造模后各组间小鼠膝关节软骨下骨血管形成相关因子的影响:运用免疫荧光染色评估软骨下骨CD31及Endomucin来确定H型血管（CD31+Endomucin+）的变化。其次检测了基质金属蛋白酶2（MMP-2）在各组中的变化。结果:（1）异甘草素对骨关节炎软骨细胞中NF-κB通路及降解因子的影响:1.诱导期第14天,通过1%阿尔新蓝染色可见,ATDC5细胞系分泌大量的蛋白多聚糖,染色成明显蓝色,诱导期第21天仍然可以看到明显的蓝色,但和14天没有明显差异。在诱导培养基成软骨细胞诱导14天内,Ⅱ型胶原的表达量逐渐上升并在14天达到峰值,第21天时有明显下降。同时,Ⅹ型胶原的表达量逐渐增加,到21天达到峰值。因此,我们选取诱导14天的ATDC5软骨样细胞作为后续实验的样本。2.异甘草素浓度在10μmol/l以内时,对ATDC5软骨样细胞活性未见明显影响（p>0.05）,但在20μmol/l及40μmol/l时明显降低ATDC5软骨样细胞活性,通过流式细胞分析也同样可看到,当异甘草素浓度升高至20μmol/l时,大量细胞开始凋亡（p<0.05）。10ng/ml IL-1β作用在ATDC5软骨样细胞后细胞活性明显降低（p<0.05）,大量细胞凋亡,而随着加入异甘草素的浓度逐渐增多至10μmol/l,细胞活性逐渐升高,凋亡的细胞逐渐减少。但异甘草素浓度达到20μmol/l时,细胞活性再次明显降低,大量细胞凋亡（p<0.05）。3.Ⅱ型胶原的表达量在单纯加入10ng/ml IL-1β后有明显的下降（p<0.05）,但随着加入的异甘草素的浓度逐渐增加,成浓度依赖性的增加（p<0.05）。相反,环氧合酶2（COX-2）和基质金属蛋白酶13（MMP-13）的表达量在10ng/ml IL-1β刺激后明显升高（p<0.05）,但随着加入的异甘草素的浓度逐渐增加,成浓度依赖性的降低（p<0.05）。4.在单纯加入10ng/ml IL-1β后,Bcl-2表达明显降低（p<0.05）,但随着加入的异甘草素的浓度逐渐增加,成浓度依赖性的增加（p<0.05）。与Bcl-2相反,促进细胞凋亡的Bax基因在加入10ng/ml IL-1β后表达量明显升高（p<0.05）,但随着加入的异甘草素的浓度逐渐增加,成浓度依赖性的降低（p<0.05）。Casepase-3及Casepase-9的表达在各组之间并没有明显变化（p>0.05）,但Cleaved-Casepase-3和Cleaved-Casepase-9作为促进细胞凋亡的活性成分,在单纯加入10ng/ml IL-1β后明显升高（p<0.05）,随着加入的异甘草素的浓度逐渐增加,成浓度依赖性的降低。NFκBp65的表达各组之间并没有明显的变化（p>0.05）,但磷酸化的NFκBp65（p-p65）在单纯加入10ng/ml IL-1β后明显升高（p<0.05）,随着加入的异甘草素的浓度逐渐增加,成浓度依赖性的降低（p<0.05）。（2）异甘草素对早期骨关节炎软骨下骨中RANKL-RANK-TRAF6信号通路及TGF-β1的影响:1.前交叉韧带切除术后30天,60天我们安乐死小鼠,进行初期的番红-固绿染色,发现模型组在两个时间点软骨都有明确的蛋白聚糖的丢失和软骨面的破坏,而治疗组明显预防了软骨内蛋白聚糖的丢失和软骨面的破坏。基于番红-固绿的国际骨关节炎协会（Osteoarthritis Research Society International）改良版评分也同样提示,治疗组与安慰剂组相比,评分明显改善（p<0.05）,且与假手术组没有统计学差异（p>0.05）。HE染色结果提示,在造模术后60天,安慰剂组的钙化软骨明显增厚超过透明软骨（p<0.05）,而治疗组与安慰剂组相比降低了钙化软骨的厚度（p<0.05）。免疫组织化学染色及荧光染色结果提示,模型组lubricin表达明显减少（p<0.05）,而在治疗组可以看到异甘草素保留了软骨内的lubricin（p<0.05）。MMP-13及代表软骨降解的Ⅹ型胶原在模型组明显高表达（p<0.05）,并与假手术组有统计学意义,而在异甘草素治疗组表达明显下降（p<0.05）。2.术后30天及60天的结果提示,安慰剂组BV/TV（%）在术后30天,60天都有明显的下降（p<0.05）,而异甘草素治疗组保留了软骨下骨的骨量（p<0.05）。另外,和安慰剂组相比,异甘草素降低了骨小梁模式因子（p<0.05）,增加了软骨下骨板的厚度（p<0.05）,这些指标与假手术组相比没有明显的统计学差异（p>0.05）。安慰剂组软骨下骨髓腔内TRAP+的破骨细胞明显增多,这与Micro-CT结果相一致。而异甘草素治疗组明显降低了TRAP+的破骨细胞。同时,我们观察到安慰剂组Osterix阳性细胞数量明显增加（p<0.05）且聚在软骨下骨骨髓腔,而并没有迁移到骨吸收部位去偶联骨吸收。而异甘草素治疗组减少了髓腔内的Osterix阳性细胞（p<0.05）并可以看到少有的Osterix阳性位于骨形成的边缘并未位于髓腔内。在安慰剂组中,RANKL及TRAF6在软骨髓腔内共表达明显升高（p<0.05）,而这一升高被异甘草素所抑制,并与假手术组并没有明显差异（p>0.05）。ELISA测定了小鼠外周血中破骨细胞骨吸收的标记物CTXⅠ,发现三组之间该指标并没有明显的差异（p>0.05）。3.安慰剂组中的nestin+间充质干细胞明显增多（p<0.05）,而异甘草素降低了nestin+间充质干细胞的表达,并与假手术组没有明显的差异。在安慰剂组中,p Smad2/3阳性的细胞明显增多（p<0.05）。而异甘草素明显降低了这种异常高表达的p Smad2/3（p<0.05）。我们对小鼠0天,7天,14天,30天的样本进行免疫组织化学染色,发现p Smad2/3阳性的细胞与TRAP+破骨细胞的变化趋势相一致。（3）基于RANKL-RANK-TRAF6信号通路探究异甘草素对早期骨关节炎软骨下骨异常血管形成的影响:1.Micro-CT扫描结果提示,在术后30天时,安慰剂组软骨下骨的血管数量及体积与假手术组相比明显增多（p<0.05）,而异甘草素减低了这种异常增加的显微血管（p<0.05）。2.在安慰剂组中,CD3l+和Endomucin+共表达阳性明显增多（p<0.05）,而异甘草素明显降低了CD3l+和Endomucin+的表达（p<0.05）。说明异甘草素对H型血管有明显的抑制作用。3.通过免疫荧光染色证实,在术后30天,安慰剂组中软骨下骨内MMP-2表达明显升高（p<0.05）,但异甘草素降低了异常高表达的MMP-2并与假手术组相比,没有明显差异。结论:（1）1.异甘草素通过下调关节软骨细胞内的NF-κB通路,抑制了IL-1β刺激下软骨细胞的凋亡及降解。（2）异甘草素通过下调软骨下骨RANKL-RANK-TRAF6通路直接抑制TRAP+破骨细胞的分化,降低破骨细胞骨吸收,间接减少有活性的TGF-β1的释放,从而降低骨髓间充质干细胞内p Smad2/3通路的表达,阻止其异常的迁移及异位成骨,最终抑制异常的软骨下骨骨重建,维持软骨下骨的显微结构,保证了正常的应力分布从而保护上层的关节软骨。（3）异甘草素通过直接抑制MMP-2的表达,间接抑制TGF-β信号通路,从而降低异常显微血管的形成来调节软骨下骨的骨重塑,抑制异常的骨形成,维持软骨下骨的显微结构并最终缓解骨关节炎的发生。
谭新颖[6]（2014）在《同种异体骨髓间充质干细胞复合同种异体冻干骨修复比格犬半侧下颌骨缺损的实验研究》文中提出【研究背景】由于外伤、肿瘤、先天性畸形、感染等原因造成的下颌骨缺损重建是临床上常见的问题。下颌骨上附着有大量的肌肉、韧带组织，是面部唯一能活动的骨骼，它的结构较为复杂，是面下1/3外形轮廓的主要组成部分，与说话、咀嚼、吞咽等口腔功能密切相关。下颌骨的缺损不仅影响患者的容貌外形，而且严重影响患者的心理健康。大段下颌骨的缺损修复一直是口腔颌面外科医生所面临的一大难题。自体骨移植修复下颌骨缺损的效果较好，但是外形欠佳、骨量有限，无法满足较大缺损的修复，而且自体骨移植常常造成供区解剖结构和功能的损害，增加了患者的痛苦。因此，这就需要我们去寻求新的修复重建方法。近年来骨组织工程的发展为下颌骨缺损的修复重建提供另一方法，但目前骨组织工程所用支架强度难以达到临床要求，同时也较难恢复下颌骨形态。【目的】为了解决大段下颌骨缺损重建的修复难题，通过建立比格犬半侧下颌骨缺损的动物模型，运用组织工程的原理和方法，创新性的提出以同种异体冻干下颌骨为支架材料复合同种异体骨髓间充质干细胞修复大段下颌骨缺损的重建方案，探索大段下颌骨缺损修复的新方法，为临床大段下颌骨缺损修复提供实验依据。【方法】1.切取比格犬右侧下颌骨，剥离附着的软组织，进行冲洗、脱脂、冷冻及冻干处理，经辐照灭菌后，常温保存。通过组织学、扫描电镜及生物力学弯曲及压缩试验进行检测；2.分离培养雄性比格犬骨髓间充质干细胞，体外扩增培养，向成骨、成脂方向诱导分化，并通过流式细胞仪对分离的骨髓间充质干细胞的表面标志物进行鉴定。将冻干骨片与骨髓间充质干细胞共培养，通过MTT绘制生长曲线，观察冻干骨对细胞增殖的影响，并用扫描电镜观察细胞在冻干骨表面的生长情况；3.手术拔除比格犬右侧下颌牙齿，2个月后从口外切口，进行半侧下颌骨切除，采用同种异体冻干骨和自体骨修复缺损，术后3个月通过CT扫描及大体观察进行评估，建立下颌骨缺损重建的动物模型；4.通过雄性犬的骨髓间充质干细胞复合同种异体冻干骨移植到雌性比格犬体内异位移植，采用原位杂交的方法示踪移植的干细胞在移植骨组织内的存活情况，探讨同种异体干细胞的作用机制；5.正常下颌骨与单纯同种异体下颌骨、冻干骨复合自体骨髓间充质干细胞及冻干骨复合同种异体间充质干细胞移植修复比格犬半侧下颌骨缺损进行比较，术后1、3、6月通过CT扫描、大体观察、组织学检测、Micro-CT骨密度检测及外周血白介素2、4、6的水平，比较正常下颌骨与其他三组的修复效果及免疫学反应；6.自2008年1月～2014年1月,我们采用同种异体冻干下颌骨复合自体骨髓对25例大段下颌骨缺损的患者进行修复手术，术后随访最长6年，术后通过CT、全口曲面断层片、ECT骨三项、体格检查进行评估；7.构建了数字化外科平台，并对运用数字化外科平台对2005年1月至2014年1月在我院口腔颌面外科就诊的颌面部缺损、畸形患者进行的颌骨缺损畸形整复手术进行回顾性分析。【结果】1.同种异体冻干骨内部无细胞成分，冻干法对骨组织结构没有明显破坏。弯曲实验的冻干骨的最大载荷486.67±134.12N、最大位移0.67±0.15mm和刚度1151.67±256.46N.mm-1。新鲜骨的最大载荷688.97±92.07N、最大位移1.05±0.11mm和刚度791.83±177.79N.mm-1。新鲜组的最大载荷和最大位移显着高于冻干组（P <0.01）而刚度显着低于冻干组（P <0.05）。压缩试验中，新鲜骨压缩实验的最大载荷5079.5±1014.98N、最大位移1.01±0.16mm和刚度9837.83±1580.63N.mm-1。冻干骨压缩实验的最大载荷5163.10±730.16N、最大位移0.78±0.19和刚度11069.17±1758.12N.mm-1。压缩实验的断裂部位在舌侧骨皮质相对薄弱处。压缩实验结果显示新鲜组与冻干骨的最大载荷、刚度相比无显着性差异（P>0.05）,而新鲜组的最大位移显着高于冻干组（P <0.05）；2.骨髓间充质干细胞第1、3、6代细胞之间的细胞增殖无显着性差异，骨髓间充质干细胞流式细胞表面标志物检测之后，CD90、CD105、CD73呈阳性，CD45、CD34、 CD31、 CD14和HLA-DR呈阴性，表现出间充质干细胞的特点。扫面电镜可见细胞贴敷于骨组织表面生长，细胞生长曲线显示同种异体冻干骨对同种异体骨髓间充质干细胞的增殖影响不大；3．通过CT扫描及大体观察，自体骨与同种异体冻干骨能够修复比格犬半侧下颌骨缺损，成功构建比格犬半侧下颌骨缺损的动物模型；4．术后3月在移植同种异体骨复合干细胞组中可以检测到Y染色体特异性的基因片段，而在对照组中没有显示。说明移植的骨髓间充质干细胞在骨组织中存活并参与了新骨的形成。5．术后1、3、6个月，对比格犬实施安乐死，每组处死3只,经大体观察及CT扫描显示单纯冻干骨，骨表面的孔未痕迹明显，成骨速度缓慢；而冻干骨与自体干细胞及同种异体干细胞组骨组织吸收明显，成骨速度较快，骨表面的孔已经愈合。组织学显示术后1、3、6月冻干骨复合自体及同种异体干细胞组的成骨速度、血管化成骨均优于单纯冻干骨组。术后6个月，4组之间微血管密度数据统计学结果：同种异体冻干骨组+自体干细胞及同种异体干细胞组微血管密度两者之间未见显着性差异（P>0.05），但均比正常下颌骨组多（P<0.05），而单纯同种异体冻干骨组的微血管密度明显少于其他三组(（P<0.05）。术后1、3、6月抽取4组比格犬外周血，检测白细胞介素2、4、6的水平，结果显示:4组1、3、6月白细胞介素2、4、6未见无显着性差异（P>0.05）。通过Micro-CT对术后6月4组骨组织进行骨密度检测，结果显示单纯的同种异体冻干骨的骨密度与其他三组相比显着降低（P<0.05）。同种异体冻干骨复合自体及同种异体干细胞组两组之间没有显着性差异（P>0.05）,复合干细胞的2组与正常下颌骨组的骨密度相比未见显着性差异（P>0.05）。通过术前、术后下颌骨CT体积测量，比较分析4组下颌骨体积的变化情况。结果显示单纯同种异体冻干骨、同种异体冻干骨复合自体及同种异体干细胞组体积均显着减少（P<0.05），单纯同种异体冻干骨、同种异体冻干骨复合自体及同种异体干细胞组三组之间体积之间无显着性差异（P>0.05）。6．同种异体冻干骨复合自体骨髓修复25例患者大段下颌骨缺损，术后复查（最长观察6年），除1例患者由于口内黏膜破溃而发生感染，经处理后愈合，移植骨局部吸收，其他所有患者颌骨愈合良好，面容恢复良好，患者满意，未出现严重并发症。7．在个人计算机上将图像采集设备获得的数据通过多种软件与各种输出设备相结进行图像分割、定量测量、模拟手术、修复体制作、手术导航等，成功构建数字化外科平台；并运用数字化外科平台对2005年1月至2014年1月间12名患者进行颌骨缺损重建手术，术后患者的面型明显改善，伤口愈合良好，患者均满意。【结论】1.同种异体冻干骨经物理及化学方法处理后够清除骨组织内的细胞，且能够满足大段下颌骨缺损修复的生物力学要求，是一种性能优良的体内组织工程支架材料；2.成功构建比格犬半侧下颌骨缺损的动物模型；3.通过Y染色体标记同种异体骨髓间充质干细胞复合同种异体冻干骨体内移植结果显示移植的干细胞参与新骨形成；4.复合骨髓间充质干细胞的同种异体骨骨改建速度比没有加细胞的同种异体骨明显，愈合是从宿主骨向移植骨，从周围向中央，从哈佛管向四周逐渐进行爬行替代的过程。5.以同种异体冻干下颌骨为支架复合同种异体骨髓间充质干细胞能够加速移植骨的血管化，促进新骨生成；6.同种异体下颌骨移植修复大段下颌骨缺损经长期临床随访观察，无排异反应，面容恢复满意，逐渐成骨，愈合良好，可以作为临床修复下颌骨缺损的一种选择；7.数字化外科平台将不同数据影像经处理后相互整合，识别不同格式的数据，将不同软件和硬件的功能结合起来发挥作用，能够帮助术前诊断、制定治疗计划，辅助手术实施，能够缩短手术时间，为医、教、研工作提供强有力的技术支持。
李斯翰[7]（2014）在《改良富血小板血浆对人骨髓间充质干细胞体外增殖及矿化作用的实验研究》文中研究说明背景和目的1993年Hood等首先提出了富血小板血浆（platelet-rich plasma, PRP）的概念[l],PRP是通过离心全血后得到的血小板浓缩物,含有高浓度生长因子。不同于原来造价昂贵、使用剂量高、有效期限短且无法有效传递至目标细胞的重组人类生长因子,作为一种自体生物材料,PRP具有制备简单、易于操作、价格低廉、生物安全性高、并发症（如疾病传播和免疫反应）少等优点[4],故被广大研究者和临床医师公认为具有广阔的应用前景。激活的PRP通过大量生长因子如血小板衍生生长因子（PDGF）、胰岛素样生长因子（IGF）和转化生长因子p （TGF-p）等发挥联合或协同作用,影响成骨细胞的趋化、增殖和分化,促进骨组织的形成和再生,至今PRP已被成功应用于颌骨、颅骨和脊柱的骨移植手术、心血管手术和相关的代谢性骨疾病的治疗。在骨组织工程研究中,寻找能充分发挥组织再生潜力的支架材料和构建生物学微观环境是研究的核心内容。Xie,X等的研究表明：PRP可形成一个网眼样超微结构组成的3D支架,并能释放内源性生长因子,且迅速与细胞结合。间充质干细胞植于PRP支架后表现出较高的增殖速率、软骨相关基因和蛋白的表达。在兔的骨缺损模型中植入含有骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）的PRP支架也表现出更好的成软骨方面的大体和组织学、免疫组织化学特性,成软骨相关基因和蛋白的表达增强,且可促进软骨下的骨组织再生。在骨的形成和修复中骨膜通过血管形成和提供骨祖细胞发挥着关键作用。Elbackly RM等提出了使用PRP薄膜和自体骨髓来源BMSCs （PRP/BMSCs凝胶薄膜）作为骨膜替代物围绕着骨引导支架来引导骨缺损的再生,研究发现PRP/BMSCs凝胶薄膜在体外能够显着地诱导人内皮细胞的迁移,并且增加人工培养的BMSCs的骨形态发生蛋白-2（BMP-2）表达；这些细胞还分泌大量的可溶亲血管生成因子如PDGF-BB、VEGF、IL-8等,促进血管的形成。最终,PRP/BMSCs凝胶薄膜作为骨膜替代物在免疫抑制小鼠和兔部分骨缺损动物模型中,均验证了它在骨膜仿生中发挥的增强骨再生作用。刘兴文等[8]通过体外观察PRP对自体BMSCs碱性磷酸酶活性的影响,结果显示PRP能促进BMSCs成骨标志物碱性磷酸酶活性,说明PRP能诱导BMSCs向成骨细胞分化,并且提高BMSCs的分化能力。但是,也有一些反对者认为PRP没有或很少有正面的促进作用。Aghaloo等[9]在一个对兔颅骨缺损修复的动物实验中发现,PRP加入自体骨移植后组织形态评估显示仅轻度大于单独的自体骨移植,并未发现显着性差异。一些研究甚至表明PRP起到了负面的抑制作用,PRP在免疫功能不全的老鼠实验模型中,减少了脱矿骨基质的成骨诱导,并且抑制了脱矿骨基质的活性。BMSCs来源于中胚层,具有很强的自我复制和横向分化潜能,大量的研究表明,在体外特定的诱导条件下BMSCs可分化为骨、软骨、神经、脂肪、肌肉及肝等多种功能细胞,对间质组织如骨、软骨、肌键、脂肪和骨髓基质的再生也有重要作用。Maniatopoulos等首次报道了从成年大鼠的骨髓获取的BMSCs,在体外培养条件下能形成钙化的骨样组织,经X线衍射分折,证实钙化组织具有羟基磷灰石样结构。实验表明体外培养BMSCs可以向成骨细胞分化并形成类骨组织。Ouyang等在培养基内加入抗坏血酸后发现BMSCs排列紧密呈片状生长,将BMSCs片与移植骨片结合植入受损部位,3周后形态与组织学结果表明,植入物的结构与正常骨膜相似,并向成骨分化。国内诸多研究也证实BMSCs的体外成骨转化。由于BMSCs免疫原性较弱、培养技术简便、体外增殖迅速、且可被冷冻保存,因此它己成为细胞及基因治疗研究中的种子细胞,并具有潜在的临床应用价值。现阶段在BMSCs的体外研究中,细胞的体外培养、扩增、分化和冻存等一般都需使用含胎牛血清或小牛血清制品,外源性血清的使用,使得干细胞在骨组织工程及临床应用中存在导致人畜共患疾病传播的风险。而现有的PRP制备一般需加入外源性物质（氯化钙、人或牛凝血酶等）来激活血小板,以促进大量的生物活性蛋白的产生和释放,外源性物质的加入,使PRP应用于临床及骨组织工程研究中也存在传染病传播及免疫排斥的风险。段建民等采用液氮冻融的方式激活血小板,制成改良富血小板血浆（modified platelet-rich plasma,mPRP）,实验研究显示mPRP对人牙髓细胞、小鼠成骨细胞等的增殖具有明显促进作用,并且该作用具有浓度依赖性。与传统的血小板激活方式相比,液氮冻融不仅可以完好保存血小板内生长因子和生物活性蛋白的活性,而且可以避免因使用人或动物等外来凝血酶而出现传染性疾病和免疫排斥反应的风险。本实验的目的是观察mPRP对体外培养的人BMSCs增殖及成骨向分化的作用效果,进而为将来使用mPRP替代外源性血清制品,来提高骨组织工程中人BMSCs（种子细胞）体外扩增培养的生物安全性提供实验依据。方法1.mPRP的制备从提供骨髓的志愿者肘静脉采集血小板,二次离心法分离获得PRP,全血细胞分析仪进行血小板计数后,将PRP分装入冻存管内,液氮反复冻融3次激活后离心,吸取上清液过滤用于实验。2.人BMSCs的分离和培养抽取健康志愿者骨髓血5mL,密度梯度离心法分离人BMSCs,连续3代传代纯化培养。3.人BMSCs的鉴定取第三代人BMSCs,以1×105个／孔的密度接种于6孔板中,待细胞进入对数生长期后分别换为成脂诱导液和矿化诱导液,于诱导第14d、21d后分别进行油红O染色和茜素红染色。取人BMSCs悬液行流式细胞术检测细胞表面抗原CD44、CD105、CD34、 STRO-1。4.mPRP对人BMSCs增殖的作用取生长良好的人BMSCs,接种至96孔板,分别加入含2%、5%、10%、20%mPRP的a-MEM培养液,含10%胎牛血清的a-MEM培养液作为对照,隔天每组取4孔,CCK-8法测定,以时间为横轴,OD值为纵坐标绘制细胞生长曲线。5.mPRP对人BMSCs矿化的作用取第三代人BMSCs,于不同浓度mPRP矿化诱导液中培养7d,按碱性磷酸酶（ALP）试剂盒要求测定ALP活性；不同浓度mPRP矿化诱导液培养21d后,茜素红染色观察矿化结节形成情况。6.mPRP对人BMSCs中OCN和RUNX-2mRNA表达的作用实时荧光定量PCR （RT-PCR）测定以不同浓度mPRP矿化培养液培养7d的人BMSCs中OCN和RUNX-2mRNA的相对表达量。7.统计学分析采用SPSS13.0软件行单因素方差分析,结果以均数±标准差（x±s）表示,P<0.05为差异有显着性意义。结果1.PRP血小板计数全血中血小板浓度为187×109L-1, PRP中血小板浓度为1001×109L-1,约为全血浓度的5.4倍。2.人BMSCs的生长和纯化人BMSCs培养48h后可见少量细胞贴壁,细胞呈梭形,培养10d后细胞增生为成纤维样,有少许不规则突触,呈团簇状生长。约2周后细胞达到80%左右融合,连续培养至第3代时细胞形态较均一,呈长梭形,胞核居中。3.人BMSCs的鉴定结果人BMSCs经成脂诱导2周后油红O染色可见胞浆内含有橙红色融合脂滴；经成骨诱导3周后,茜素红染色可见红色矿化结节形成。人BMSCs中CD44、CD105和STOR-1表达为阳性,而CD34表达为阴性,符合人BMSCs表面标记物一般表型。4.mPRP对人BMSCs增殖的作用在不同浓度mPRP培养液培养下,人BMSCs于第4d进入对数生长期,5%-10%的mPRP组与对照组（10%FBS组）相比较,在培养第6d、8d均促进了人BMSCs的增殖,其中以10%mPRP浓度组尤为明显。5.mPRP对人BMSCs矿化的作用5%和10%浓度的mPRP均显着提高了矿化培养7d后人BMSCs的ALP活性；连续矿化培养21d后,5%mPRP组中茜素红染色矿化结节面积比显着大于对照组（10%FBS组）。6.mPRP对人BMSCs中OCN和RUNX-2mRNA表达的作用RT-PCR显示5%浓度mPRP培养的人BMSCs矿化诱导组OCN和RUNX-2mRNA的相对表达量较对照组显着上调。结论本实验成功分离培养的人BMSCs具有干细胞特性,表达干细胞表面标记物,且具有成骨向、成脂向分化能力。与胎牛血清比较,5%-10%的mPRP显着促进了人BMSCs的增殖,其中以10%浓度组尤为显着；5%的mPRP具有促进人BMSCs成骨向分化的作用。结果表明mPRP在体外促进人BMSCs增殖与分化的作用具有浓度特异性,将自体来源mPRP用于以人BMSCs为种子细胞的骨组织工程中具有较高的生物安全性。
吴锐[8]（2013）在《OGP对兔骨髓间充质干细胞体外成骨分化干预的实验研究》文中研究说明目的：探讨研究成骨生长肽（OGP）对兔骨髓间充质干细胞体外培养增殖及成骨分化的影响并探讨骨髓间充质干细胞在OGP浓度10-11-10-7mol/L范围内的细胞最适宜增殖浓度以及最适宜成骨分化浓度,为成骨生长肽（OGP）进一步实验室研究及体内研究提供可靠的理论依据方法：取达到清洁级标准,无人畜共患疾病的新西兰大白兔一只,不限雌雄,使用兔耳缘静脉空气栓塞发处死。严格遵守无菌原则取出双侧股骨干。使用DMEM/F12培养液冲洗髓腔,获得细胞悬浊液。应用全骨髓培养法分离出骨髓单核细胞,使用贴壁法可以除去没有贴壁的悬浮细胞。经过反复多次的传代培养能够获得较为纯净的贴壁细胞,使用免疫组化检测贴壁细胞的表面标记物CD44,可以证实所得的细胞为骨髓间充质干细胞。贴壁法分离获得的兔骨髓间充质干细胞,通过换液和传代纯化细胞。用传二代细胞做MTT试验,以此确定OGP对骨髓间充质干细胞增殖作用的最佳活性浓度；将传二代骨髓间充质干细胞,以2×104/m1的密度接种于96孔培养板中,每孔加入200u1细胞悬浊液。一共接种7板,每组接种6孔,每板接种36孔。分为对照组与实验组,具体如下：分为六组：A组-对照组,B组加入10-11mol/L的OGP,C组加入10-10mol/L的OGP,D组加入10-9mol/L的OGP,E组加入10-8mol/L的OGP,F组10-7mol/L的OGP。对照组为不含血清的DMEM/F12培养基。将传3代骨髓间充质干细胞接种于16孔板中,每组接种4孔,共获取16个样品。分别于第五天,十天,十五天,二十天四个时间点收集。每一时间点设置6个复孔分别检测碱性磷酸酶的活性,以确定促进骨髓间充质干细胞成骨分化最佳OGP活性浓度。分组具体如下：A组培养液为50μg/ml维生素C+10mmol/L β-甘油磷酸钠+10-7mol/LOGP；B组培养液为50μg/ml维生C+10mmol/L β-甘油磷酸钠+10-9mol/LOGP；C组培养液50μ g/ml维生素C+10mmol/L β-甘油磷酸钠+10-11mol/LOGP;D组（对照组）培养50μg/ml维生素C+10mmol/Lβ甘油磷酸钠。在最适宜骨髓间充质干细胞成骨分化的OGP浓度培养下的骨髓间充质干细胞的细胞形态学观察,以及对其进行碱性磷酸酶（ALP）Gomori钙钴染色,Von kossa改良染色,和MTB比色法进行钙定量检测。分为两组：A组对照组单纯培养液组；B组加入OGP的培养液组。结果骨髓间充质干细胞分离培养后最初培养器中造血细胞成份较多,随着时间的延长,这些杂质细胞慢慢坏死或随换液移去,2日后能够见到部分细胞开始贴壁生长,大约4日后可见大量细胞贴壁,成集落,细胞开始呈长梭形,形似成纤维细胞,呈放射状生长。培养至12天左右,细胞融合超过90%予以传代,培养到第3代后,骨髓间充质干细胞就较纯粹,极少杂质细胞。对培养细胞用免疫组化进行分析,发现骨髓间充质干细胞的特异性抗体CD44（+）。证明培养的细胞为骨髓间充质干细胞。将成骨诱导培养液加入至骨髓间充质干细胞的培养后,细胞生长表现为会有一个较长的生长平台期约一天至两天,此时细胞呈缓慢生长,于此同时细胞形态也大多发生改变,我们观察到细胞慢慢由纺锤形渐渐转变为立方形,然后变更为多边形,细胞体积变大,胞浆边浓密；对细胞进行消化传代培养,传代到P3代时,细胞会经过一长约24到48小时左右的潜伏期,在将近第150到200小时左右时,细胞度过平台期,开始呈对数生长,后仍会过渡到平台期。MTT染色法测定OGP的最大活性浓度：骨髓间充质干细胞在含有OGP的培养基中生长,光吸收度数值均比其对照组（无OGP的培养基）中的光吸收度数值要高。当培养基中的OGP浓度为10-11mol/L时,可以获得最积极的细胞生长增殖。碱性磷酸酶测定骨髓间充质干细胞活化的最适宜OGP的浓度：D组（对照组）中碱性磷酸酶的表达一直处于较低水平的表达。与其他组相比,其余组的ALP表达显着升高。而A,B,C组中又以B组（OGP浓度为10-9mol/L）的碱性磷酸酶活性表达最高。对于内含10-9mol/L的GOP的培养液对骨髓间充值干细胞成骨诱导的形态学观察,碱性磷酸酶（ALP） Gomori钙钴染色法,Von Kossa改良然染色法,以及MTB比色法进行钙定量检测：第一应用10-9mol/L的OGP的培养液后细胞渐渐由纺锤形转变为立方形,在变为多边形,细胞表面积变大,细胞核、质分界清楚,细胞浆浓密,细胞呈阶层是增长,未见接触抑制,形成广泛分布的细胞结节。第二碱性磷酸酶（ALP）Gomori钙钴染色法,于诱导后第14天至21天时发现：碱性磷酸酶在由大多数弱阳性或阴性,少数强阳性逐渐转变成几乎全部的细胞均呈现出强阳性。并且细胞质中随处可见黑色颗粒或块状沉淀。而对照组无阳性表现出现。第三Von Kossa改良然染色法测定钙的沉积,同样于诱导后第14天至21天时发现：逐渐增多,颜色加重的结节。由棕黑色逐渐变为黑色,并且越来越多,越变越大。而对照组无此变化。第四MTB比色法进行钙定量检测,在第5天,10天,15天,20天分别使用MTB比色法测定,在含有OGP （10-9mol/L）培养基培养下的骨髓间充质干细胞成骨诱导明显高于对照组（无OGP）。方差统计分析算得p<0.05,具有统计学意义。结论1.进一步证实了OGP对兔骨髓间充质干细胞的增殖活性有明显的促进作用,并且最佳作用浓度为10-11mol/L,在（10-7-10-11mol/L）浓度范围内存在负相关量效关系2.OGP促进骨髓间充质干细胞的ALP表达的最佳浓度为10-9mol/L.并且所有添加了OGP的培养基培养的骨髓间充质干细胞的成骨诱导均优于普通矿物培养基培养的骨髓间充质干细胞。
杨莉[9]（2012）在《自体PRP对钛表面成骨细胞增殖的影响及PDGF的变化》文中研究表明目的：本研究采用体外实验，建立细胞与钛片复合培养的体外培养模型，将由兔全血所制备的富血小板血浆（platelet-rich plasma，PRP）作用于其自体骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs），通过对钛片表面细胞数量及形态各项指标的检测，探讨不同浓度的自体PRP在不同时间段对钛片表面BMSCs增殖的影响以及血小板源性生长因子（PDGF）浓度的变化，进一步揭示PRP的作用机制，为临床根据生理和病理的需要，选择合适浓度的PDGF和PRP以及合理的应用时间提供实验依据。方法：①BMSCs的培养：应用全骨髓培养法取兔骨髓基质细胞（BMSCs）进行原代培养，具体方法如下：将2-3月龄新西兰大白兔以戊巴比妥钠经耳缘静脉麻醉，在腿部胫骨平台处以16#骨髓穿刺针垂直骨面，旋转进入骨髓腔，抽取4-6ml骨髓接种于培养瓶，待细胞达到90％融合时予以传代，用倒置显微镜观察原代及传代细胞形态。②绘制细胞生长曲线：于1-10d每天将接种于24孔板的第3代BMSCs各取3孔，酶消法消化后显微镜下计数，绘制细胞生长曲线。③钛片的处理：将实验用直径10mm，厚度1mm已打磨光滑的圆形钛片依次用丙酮、无水乙醇、75%乙醇及双蒸水各超声清洗20min，高温高压消毒30min，无菌保存备用。④PRP的制备：采用二次离心法分离兔全血获得PRP，仪器计数法比较全血与PRP中的血小板数目。具体步骤是，方法同上麻醉实验动物，从颈动脉处抽取所有全血约120ml，第一次先以1100r/min速度水平离心机室温离心10min，吸取全部上清及红细胞液面下2-3mm，再以2200r/min的速度离心10min，弃2/3上清，所剩1/3液体即为PRP，以牛凝血酶激活后2小时内加入到细胞培养系中。⑤PRP作用于BMSCs：将配制的含不同浓度PRP（0%、10％、20％、30％）的诱导培养液作用于生长良好的已在钛片表面适应性生长24h的第4代BMSCs，每孔设3复孔，另设空白对照组。⑥成骨细胞鉴定：取第3代BMSCs用成骨诱导培养液进行培养后，以碱性磷酸酶染色法及钙结节染色法验证其成骨分化能力。⑦MTT法检测增殖：分别在第1、4、7、10d取各孔实验组，弃去孔内培养液，清洗后加入MTT试剂于钛片上，37℃孵育4h，再加入二甲基亚砜，结晶均匀溶解后在酶标仪上测各标本的OD值。⑧ELISA法测PDGF-AB浓度：分别在第0、1、2、3、4d取各钛片组细胞的上清液，根据兔ELISA试剂盒说明检测各标本中PDGF-AB的OD值，并在标准曲线上获得PDGF-AB浓度。⑨荧光染色观察钛片表面细胞形态：在第4、7、10d取出各实验组钛片，固定后以荧光染色剂F-actin对细胞骨架进行荧光染色，再以DAPI最后复染细胞核，正置荧光显微镜下观察。结果：①倒置显微镜下细胞形态：原代BMSCs呈短梭形，至12d左右可达到80％融合，此时细胞形态为均一的长梭形，漩涡状排列，传代后的细胞形态比原代细胞更为均一，增殖迅速。根据生长曲线图可知，传代培养潜伏期一般为2-3d，4-8d为对数生长期，9-10d增殖趋于稳定，达到平台期，细胞增殖趋于平缓。②成骨能力鉴定：经成骨诱导后，碱性磷酸酶染色结果示细胞胞浆中出现红棕色、棕褐色或咖啡色颗粒，钙结节染色示结节处有橘红色钙盐沉积，即为钙化结节，均呈阳性表达，表明所培养的BMSCs具备成骨分化能力，为成骨细胞。③PRP的检测：采用二次离心法得到的PRP中血小板数目为864±37×109/ml，是全血201±26×109/ml的4.3倍。PRP经激活后，析出的上清液经兔ELISA试剂盒检测PDGF-AB值在标准曲线上能获得值为95.537±5.112ng/ml，二次离心法制备的PRP中含有高浓度的生长因子PDGF-AB。④MTT检测增殖结果：20％PRP组第7d时OD值最高，在第4d20%＞30%＞10%，差异有统计学意义（P＜0.05）；第7-10d，20%＞10%＞30%，差异有统计学意义（P＜0.05）；0%对照组各时间点间无明显变化。因此增殖作用与PRP存在时间和浓度效应，20%为最佳作用浓度。⑤PDGF-AB浓度变化：PDGF-AB值总体趋势逐渐下降，受自分泌及旁分泌影响稍有波动，但前3d仍能维持较高浓度。第4天生长因子大量衰减，即表明该因子的有效作用时间为前3天。⑥荧光染色结果示：细胞核呈蓝色，圆形或椭圆形，细胞骨架呈绿色，形态不规则，多角形，可见突起，包绕在细胞核周围，符合成骨细胞形态。结论：①本实验中各浓度（10％、20％、30％）PRP均能有效地促进BMSCs的增殖，其中20％PRP为最佳浓度。②二次离心法制备的PRP中含有高浓度的生长因子PDGF-AB，在PRP20％浓度时PDGF-AB所对应值为18.66-24.30ng/ml，为该因子作用于成骨细胞的最佳浓度范围。③PRP中生长因子PDGF-AB半衰期较短，前3天为最佳作用时间。
王宁[10]（2011）在《多发性骨髓瘤间充质干细胞TAZ和Wnt/β-catenin基因表达与其成骨潜能相关性研究》文中提出多发性骨髓瘤（Multiple Myeloma, MM）是一种常见的恶性肿瘤,大约占人类全部恶性肿瘤的1%,血液系统恶性肿瘤的10%-15%。主要病理特征是骨髓中出现无限扩增的异常浆细胞。多发性骨髓瘤骨病（Multiple Myeloma Bone Disease, MBD）是其临床特点之一,主要表现为骨质疏松、溶骨性损害、病理性骨折、高钙血症和骨痛,其机制是由于破骨细胞（osteoclast, OC）数量和活性增加,溶骨性骨吸收增加,成骨细胞被抑制,骨生成障碍。在骨髓微环境中,骨髓瘤细胞、骨髓基质细胞、成骨细胞（osteoblast, OB）及OC表达和产生一些细胞因子：如白介素IL-6、IL-1β、血管内皮细胞生长因子（VEGF）、巨噬细胞炎症蛋白-1a（MIP-1a）、核因子（NF）-кB的受体激活剂RANK及其配体RANKL,还有骨保护素（OPG）等,均参与MBD的发生。这些细胞因子相互作用引起OC活性增强,OB活性减弱,造成溶骨性损害,同时新骨生成障碍,这是MBD发生的主要机制。骨髓瘤细胞本身是MM骨损害发生发展直接或间接的重要因素,在有关细胞因子的作用下,OC活性增强则进一步促进了骨病的发生。骨髓间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells, MSCs）,是一群来源于骨髓组织中的非造血细胞,一方面在空间上起支持作用；另一方面在造血功能上起着精细调节作用。MSCs是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞,是成人干细胞中基于细胞治疗和基因治疗理想的种子细胞,在一定条件下MSCs可分化成为成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞、腱细胞、脂肪细胞和基质成纤维细胞等。与正常人MSCs相比,MM患者MSCs表面VCAM-1和粘连素低表达,而IL-1β和TNF-a的表达则明显增加。通过细胞因子的产生和细胞与细胞之间的接触,MSCs提供了对于骨髓瘤细胞在骨髓中生长和存活具重要意义的旁分泌因子。MSCs产生与正常稳态造血相关的细胞因子包括IL-6,G-CSF和GM-CSF。简单的说,MSCs通过上述细胞因子参与了MM的发生与发展。Runx2/Cbfal作为调节成骨分化相关基因的关键转录调节因子,其活性在MM患者成骨前体细胞中明显受抑。TAZ作为Runx2/Cbfal的共刺激因子,通过结合可以促进MSCs向成骨细胞分化；Wnt/β-catenin通路作为成骨细胞增殖的关键性途径,在MSCs向成骨细胞转化中起着重要作用。目的研究TAZ和Wnt/β-catenin mRNA的表达对MM患者MSCs成骨转化潜能的影响,分析MM患者MSCs成骨诱导后TAZ和Wnt/β-catenin mRNA的表达,探讨其作为MBD潜在治疗靶点的价值。方法收集10例初治MM患者骨髓标本,以10例正常人骨髓标本为对照。MM患者和正常人骨髓单个核细胞分离、纯化、培养,细胞形态学观察,细胞流式细胞仪鉴定免疫表型和纯度。骨髓MSCs在体外培养过程中,第三代生长良好的骨髓MSCs采用含10%FBS、1×10-88mol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50μg/ml维生素C的DMEM继续培养21天,诱导分化成骨,采用茜素红染色法观察矿化物沉积。荧光定量RT-PCR法测MSCs及诱导成骨分化后TAZ和Wnt/β-catenin mRNA以及成骨细胞相关因子OPN, OC, ALP和Cbfal mRNA表达量。分析两组间TAZ和Wnt/p-catenin mRNA表达差异。对试验数据进行统计学分析,符合正态分布并且方差齐性的数据,采用两个样本的t检验,不符合正态分布并且方差不齐的数据,采用两独立样本非参数检验,检验水准α=0.05,以P<0.05为差异有统计学意义,实验结果结合临床分析。结果MM患者骨髓MSCs体外诱导细胞,茜素红染色呈现明显红色,TAZ、β-catenin、OPN、OC、ALP、Cbfal mRNA表达增高；多发性骨髓瘤患者成骨细胞TAZ、β-catenin mRNA表达分别为2.2315±1.0723,0.5801±0.2159,与对照组（4.414±0.8325、0.9516±0.292）比较,差别有统计学意义（P<0.05）。结论骨髓MSCs体外成骨细胞诱导后,成骨细胞相关基因OPN、OC、ALP、Cbfal mRNA表达增高,成功诱导分化为成骨细胞。与对照组比较,MM患者骨髓MSCs成骨细胞相关基因OPN、OC、ALP、Cbfal mRNA表达降低,证明MM患者骨髓MSCs体外诱导成骨潜能降低,并且MM患者骨髓MSCs成骨细胞TAZ和Wnt/β-catenin mRNA表达比正常人降低。TAZ是一种转录因子,可调节MSC向成骨分化而抑制成脂分化。经典的Wnt/β-catenin通路是成骨过程中的重要信号传导通路,未磷酸化的β-catenin进入核内刺激成骨基因的表达；Wnt/β-catenin信号通路可以直接激活Runx2/Cbfal基因表达,促进OB形成。基于以上的研究,TAZ和Wnt/β-catenin基因可作为MBD潜在治疗靶点。通过定向诱导修饰MSCs向“全功能”成骨细胞分化,为将来自体骨髓间充质干细胞治疗MBD奠定基础。
二、肝素钠对骨髓基质细胞增殖及成骨转化的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肝素钠对骨髓基质细胞增殖及成骨转化的影响（论文提纲范文）
（1）回阳生肌汤和鸡血藤对慢性皮肤溃疡愈合过程中MSCs趋化和迁移功能的调节作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词(表) |
| 综述 |
| 综述一 干细胞在创面修复中的研究进展 |
| 1 表皮干细胞 |
| 2 间充质干细胞 |
| 3 毛囊干细胞 |
| 4 细胞外囊泡 |
| 5 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 回阳生肌法治疗慢性皮肤溃疡的研究进展 |
| 1 疮疡的阴阳辨证 |
| 2 回阳生肌法的现代理论体系 |
| 3 回阳生肌法促进慢性皮肤溃疡愈合的机制 |
| 4 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 实验一 回阳生肌汤和鸡血藤水提物入血成分分析 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 回阳生肌汤对db/db糖尿病小鼠伤口愈合及BMSCs增殖能力的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 回阳生肌汤对骨髓抑制大鼠伤口愈合及BMSCs增殖、趋化和迁移能力的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 实验四 鸡血藤水提物对骨髓抑制大鼠伤口愈合及BMSCs增殖、趋化和迁移能力的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 实验五 回阳生肌汤和鸡血藤水提物体外对氧化损伤大鼠BMSCs增殖、趋化和迁移能力的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 存在的问题与不足 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（2）新型多孔钽金属的制备及在股骨头坏死治疗中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要符号表 |
| 1 绪论 |
| 1.1 研究背景及意义 |
| 1.2 国内外相关工作研究进展 |
| 1.2.1 多孔钽金属在骨科中的应用 |
| 1.2.2 多孔钽金属材料的制备 |
| 1.2.3 股骨头坏死发病机制与病因 |
| 1.2.4 股骨头坏死的分期 |
| 1.2.5 股骨头坏死的治疗 |
| 1.3 本文主要研究思路 |
| 1.3.1 选题依据 |
| 1.3.2 研究内容 |
| 1.3.3 主要研究内容技术路线图 |
| 2 新型多孔钽金属材料的制备与表征 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与设备 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验设备 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.4 性能检测 |
| 2.4.1 不同H_2流量下样品表面显微分析 |
| 2.4.2 扫描电镜显微分析 |
| 2.4.3 超景深三维数字显微系统表征 |
| 2.4.4 SEM测量涂层厚度及EDX能谱分析表征 |
| 2.4.5 X射线衍射(XRD)分析表征 |
| 2.4.6 力学性能分析 |
| 2.4.7 涂层与基体结合力测定 |
| 2.5 结果 |
| 2.5.1 不同H2流量下样品表面显微形貌 |
| 2.5.2 多孔钽生物形貌观察 |
| 2.5.3 超景深三维数字显微系统观测 |
| 2.5.4 SEM测量涂层厚度及EDX能谱分析 |
| 2.5.5 X射线衍射(XRD)分析 |
| 2.5.6 多孔钽金属材料的力学性能 |
| 2.5.7 涂层与基体结合力 |
| 2.6 讨论 |
| 2.7 小结 |
| 3 新型多孔钽金属材料初步生物相容性评价 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与仪器 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 主要实验仪器和试剂 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 多孔钽材料制备及消毒 |
| 3.3.2 实验动物分组及模型制备 |
| 3.3.3 兔BMSCs培养及鉴定 |
| 3.3.4 BMSCs与多孔钽支架材料共培养及分组 |
| 3.3.5 MTT法检测各组细胞生长及增殖情况 |
| 3.3.6 扫描电镜观察兔BMSCs在新型多孔钽生长增殖情况 |
| 3.3.7 多孔钽支架材料体内组织相容性观察 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 多孔钽支架材料的观察 |
| 3.4.2 骨髓基质干细胞的形态特征观察及鉴定 |
| 3.4.3 BMSCs与多孔钽材料支架共培养后形态特征观察 |
| 3.4.4 MTT法检测多孔钽支架材料对BMSCs生长、增殖的影响 |
| 3.4.5 通过电镜扫描观察BMSCs在多孔钽支架材料上粘附生长情况 |
| 3.4.6 体内相容性观察 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 4 新型多孔钽金属复合骨髓基质干细胞修复骨坏死的实验研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与仪器 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 主要试剂与仪器 |
| 4.3 体外实验 |
| 4.3.1 兔成骨细胞的定向诱导与鉴定 |
| 4.3.2 BMSCs与支架材料共培养及分组 |
| 4.3.3 MTT法检测各组细胞生长及增殖情况 |
| 4.3.4 BMSCs的绿色荧光蛋白(GFP)染色 |
| 4.3.5 成骨细胞基因PCR检测 |
| 4.4 体内试验 |
| 4.4.1 实验动物分组及对照设计 |
| 4.4.2 麻醉方法 |
| 4.4.3 激素性骨坏死动物模型的建立 |
| 4.4.4 植入手术方式 |
| 4.4.5 取材与硬组织切片 |
| 4.4.6 免疫组织化学分析 |
| 4.4.7 硬组织切片 |
| 4.4.8 推出实验 |
| 4.5 统计学处理 |
| 4.6 实验结果 |
| 4.6.1 成骨细胞的形态特征观察 |
| 4.6.2 成骨细胞的鉴定 |
| 4.6.3 MTT法检测各组骨髓基质干细胞生长增殖情况 |
| 4.6.4 骨髓基质干细胞绿色荧光蛋白(GFP)染色 |
| 4.6.5 PCR检测成骨基因 |
| 4.6.6 激素性兔股骨髁坏死模型的评估 |
| 4.6.7 手术过程及术后观察 |
| 4.6.8 免疫组织化学染色 |
| 4.6.9 硬组织切片 |
| 4.6.10 推出实验 |
| 4.7 讨论 |
| 4.8 小结 |
| 5 新型多孔钽金属棒复合骨髓基质干细胞联合带血管蒂髂骨瓣转移治疗股骨头坏死的临床研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 研究对象 |
| 5.3 评估工具 |
| 5.3.1 双髋关节正位X线片 |
| 5.3.2 髋关节Harris评分 |
| 5.3.3 视觉模拟评分VAS量表 |
| 5.3.4 三维步态测量与分析 |
| 5.4 方法 |
| 5.4.1 新型多孔钽金属棒的设计 |
| 5.4.2 骨髓基质干细胞提取与培养 |
| 5.4.3 手术技术 |
| 5.4.4 术后处理和随访 |
| 5.4.5 双髋关节正位X线片 |
| 5.4.6 髋关节Harris评分 |
| 5.4.7 视觉模拟评分VAS量表的计分方法 |
| 5.4.8 统计学分析 |
| 5.5 结果 |
| 5.6 典型病例 |
| 5.7 讨论 |
| 5.8 小结 |
| 6 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）生物可吸收PLLA血管内支架对内膜修复和血管重构的影响及其机理研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 主要缩略词表 |
| 1 绪论 |
| 1.1 研究背景与研究意义 |
| 1.2 生物可吸收PLLA支架的研究现状与问题 |
| 1.2.1 PLLA血管内支架发展如日中天 |
| 1.2.2 PLLA血管内支架仍是未来的发展趋势 |
| 1.2.3 PLLA血管内支架的降解与血管修复 |
| 1.2.4 PLLA血管内支架植入后的力学变化 |
| 1.3 血管内支架植入后血管细胞表型转化及钙化 |
| 1.3.1 血管内支架植入对血管细胞表型的影响 |
| 1.3.2 血管内支架植入后的胞外基质变化 |
| 1.3.3 支架植入与血管钙化 |
| 1.4 本文的研究内容、研究意义和创新点 |
| 1.4.1 研究内容 |
| 1.4.2 技术路线 |
| 1.4.3 研究意义 |
| 1.4.4 研究创新点 |
| 2 PLLA血管内支架植入后的再内皮化与内皮功能恢复 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料、试剂与仪器 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 实验仪器 |
| 2.3 方法 |
| 2.3.1 大鼠腹主动脉支架植入 |
| 2.3.2 实验样品处理 |
| 2.3.3 Evans Blue染色观察新生内膜通透性与完整性 |
| 2.3.4 En face免疫荧光观察新生内膜连接与完整性 |
| 2.3.5 扫描电镜观察新生内膜修复情况 |
| 2.3.6 石蜡切片的免疫荧光染色 |
| 2.3.7 石蜡切片的CD31 免疫组化染色 |
| 2.3.8 石蜡切片的CD68/CD11b免疫荧光染色 |
| 2.3.9 统计学分析 |
| 2.4 结果分析 |
| 2.4.1 植入一般情况 |
| 2.4.2 PLLA支架植入后的再内皮化 |
| 2.4.3 PLLA支架植入后内皮屏障功能的修复 |
| 2.4.4 PLLA支架植入后新生内膜有H型趋势 |
| 2.4.5 PLLA支架植入后的血管炎症反应 |
| 2.5 小结与讨论 |
| 3 PLLA血管内支架植入后时间依赖的内膜增生与血管修复重建 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料、试剂与仪器 |
| 3.2.1 实验试剂 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 方法 |
| 3.3.1 OCT观察植入段血管直径和内膜增生 |
| 3.3.2 石蜡切片的HE染色、MASSON染色、EVG染色和天狼星红染色 |
| 3.3.3 石蜡切片的α-SMA免疫组化染色 |
| 3.3.4 图像分析 |
| 3.3.5 统计学分析 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 PLLA支架植入后血管直径变化与内膜增生的OCT分析 |
| 3.4.2 PLLA植入内膜增生和再狭窄率随时间变化先增加后减少 |
| 3.4.3 PLLA支架植入的血管修复过程胶原纤维与弹性纤维变化 |
| 3.5 小结与讨论 |
| 4 PLLA血管内支架在体降解过程与伴随的血管细胞表型变化 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料、试剂与仪器 |
| 4.2.1 实验试剂 |
| 4.2.3 实验仪器 |
| 4.3 方法 |
| 4.3.1 PLLA支架植入后支架丝的OCT观察 |
| 4.3.2 PLLA支架植入后支架丝降解的HE染色观察 |
| 4.3.3 PLLA支架植入48 周分段切片与染色 |
| 4.3.4 PLLA支架植入后的MGF/BMP2 免疫荧光染色 |
| 4.3.5 PLLA支架植入后的SM-MHC/vimentin免疫荧光染色 |
| 4.3.6 PLLA支架植入后的CD31/RUNX2 免疫荧光染色 |
| 4.3.7 PLLA支架植入后的α-SMA/RUNX2 免疫荧光染色 |
| 4.3.8 血管vonkossa染色 |
| 4.3.9 图像分析 |
| 4.4 结果分析 |
| 4.4.1 PLLA支架的植入后在体降解 |
| 4.4.2 支架植入晚期的不均匀降解导致血管修复的差异 |
| 4.4.3 PLLA支架降解过程的血管力学响应 |
| 4.4.4 PLLA支架降解过程的血管细胞表型变化 |
| 4.5 小结与讨论 |
| 5 PLLA降解产物乳酸促进血管平滑肌细胞发生成骨表型转化 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料、试剂与仪器 |
| 5.2.1 实验材料 |
| 5.2.2 实验试剂 |
| 5.2.3 实验仪器 |
| 5.3 方法 |
| 5.3.1 SD大鼠胸主动脉原代平滑肌细胞的提取 |
| 5.3.2 RASMCs的纯化、鉴定、传代培养: |
| 5.3.3 不同浓度乳酸处理RASMCs后细胞活力的测定 |
| 5.3.4 β-甘油磷酸诱导RASMCs成骨转化 |
| 5.3.5 细胞总蛋白的提取及SM22α免疫印迹 |
| 5.3.6 细胞茜素红S染色 |
| 5.3.7 细胞碱性磷酸酶染色与测定 |
| 5.3.8 细胞凋亡检测 |
| 5.3.9 不同硬度PDMS胶制备并联合LA培养细胞 |
| 5.3.10 LA处理细胞后的免疫荧光染色 |
| 5.3.11 LA处理细胞后的溶酶体、线粒体活细胞染色 |
| 5.3.12 验证LA对细胞表型影响的在体动物实验 |
| 5.3.13 统计学分析 |
| 5.4 结果与分析 |
| 5.4.1 一定浓度LA对RASMCs生长的影响 |
| 5.4.2 乳酸促进RASMCs对力学的响应 |
| 5.4.3 乳酸促进细胞成骨转化 |
| 5.4.4 乳酸促进细胞成骨表型转化的可能机制 |
| 5.5 小结与讨论 |
| 6 主要结论及后续工作建议 |
| 6.1 主要结论 |
| 6.2 后续工作建议 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| A 作者在攻读博士学位期间取得的科研成果 |
| B 作者在攻读博士学位期间参与的科研课题 |
| C 学位论文数据集 |
| 致谢 |
（4）富血小板血浆联合高位头颈开窗植骨支撑术治疗围塌陷期股骨头坏死的疗效观察及其相关实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部 综述 |
| 1.1 常用保髋术式介绍 |
| 1.2 富血小板血浆的现代研究 |
| 1.3 围塌陷期介绍 |
| 第二部分 临床研究 |
| 2.1 研究方法 |
| 2.2 统计方法 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.5 结果分析 |
| 第三部分 实验部分 |
| 3.1 实验材料与研究方法 |
| 3.2 SD大鼠骨髓间充质干细胞的获取和体外培养 |
| 3.3 分组 |
| 3.4 统计方法 |
| 3.5 结果 |
| 3.6 讨论 |
| 第四部分 结语 |
| 4.1 小结 |
| 4.2 本次研究中存在问题及展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学证明 |
（5）基于NF-κB及RANKL-RANK-TRAF6信号通路探究异甘草素对骨关节炎的作用及机制（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 NF-κB通路与骨关节炎 |
| 2 RANKL-RANK-TRAF6信号通路与骨关节炎 |
| 3 异甘草素的药理学作用 |
| 4 研究假说 |
| 第一部分 异甘草素对骨关节炎软骨细胞中NF-κB通路及降解因子的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 ATDC5细胞的软骨分化诱导及鉴定 |
| 2.2 CCK-8及PE-AnnexinV/7-ADD双荧光标记流式细胞分析评估异甘草素对IL-1β干预后的ATDC软骨样细胞的活性影响 |
| 2.3 不同浓度异甘草素对IL-1β干预后的软骨细胞降解退变相关因子的影响 |
| 2.4 评估异甘草素对IL-1β干预后的ATDC5软骨细胞凋亡相关标记因子表达及软骨细胞内NF-κB表达情况的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 异甘草素抑制早期骨关节炎软骨下骨中RANKL-RANK-TRAF6信号通路对小鼠骨关节炎软骨的保护机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 异甘草素缓解了关节软骨的破坏 |
| 2.2 异甘草素抑制骨关节炎时软骨下骨异常的骨重塑 |
| 2.3 异甘草素通过下调RANKL-RANK-TRAF6信号通路抑制破骨细胞分化 |
| 2.4 异甘草素通过抑制破骨细胞骨吸收间接抑制有活性的TGF-β释放. |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 基于RANKL-RANK-TRAF6信号通路探究异甘草素对早期骨关节炎软骨下骨异常血管形成的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 异甘草素抑制软骨下骨显微血管的数量和体积 |
| 2.2 异甘草素抑制软骨下骨CD31+Endomucin+血管 |
| 2.3 异甘草素抑制软骨下骨PDGF-BB的表达 |
| 2.4 异甘草素抑制软骨下骨MMP-2的表达 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 新疆医科大学博士研究生学位论文导师评阅表 |
（6）同种异体骨髓间充质干细胞复合同种异体冻干骨修复比格犬半侧下颌骨缺损的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 技术路线 |
| 第一部分 同种异体骨髓间充质干细胞复合同种异体冻干骨修复比格犬半侧下颌骨缺损的实验研究 |
| 实验一 同种异体冻干骨的制备及检测 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验二 骨髓间充质干细胞与同种异体骨共培养的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验三 比格犬半侧下颌骨缺损动物模型的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验四 Y 染色体标记体的骨髓间充质干细胞复合同种异体冻干骨体内异位成骨的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验五 同种异体骨髓间充质干细胞复合同种异体冻干骨修复比格犬半侧下颌骨缺损的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第一部分小结 |
| 第二部分 同种异体冻干骨复合自体骨髓修复大段下颌骨缺损的临床研究 |
| 实验一 |
| 1 病例与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 小结 |
| 第三部分 数字化外科平台的构建及其在颌面缺损畸形中的临床应用研究 |
| 实验一 数字化医学平台的构建 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验二 数字化外科平台在颌面缺损畸形中的临床应用 |
| 1 病例与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 小结 |
| 全文总结 |
| 综述一：下颌骨缺损修复研究进展 |
| 综述二：同种异体下颌骨移植研究进展 |
| 综述三：组织工程及骨髓间充质干细胞在颌骨缺损修复中的研究进展 |
| 综述四：3D 打印技术在口腔颌面外科领域中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 博士期间发表文章情况 |
| 博士期间参与科研课题 |
| 专利 |
| 博士研究生期间参加的主要会议及大会发言情况 |
| 致谢 |
（7）改良富血小板血浆对人骨髓间充质干细胞体外增殖及矿化作用的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 人BMSCs的体外培养和鉴定 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二章 mPRP对人BMSCs体外增殖和免疫原性的作用 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三章 mPRP体外培养对人BMSCs成骨向分化的作用 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词简表 |
| 攻读硕士学位期间主要成果 |
| 致谢 |
（8）OGP对兔骨髓间充质干细胞体外成骨分化干预的实验研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略语表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1、材料与方法 |
| 2、方法 |
| 3、结果 |
| 4、讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 读研期间个人发展及论文发表情况 |
| 致谢 |
（9）自体PRP对钛表面成骨细胞增殖的影响及PDGF的变化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 富血小板血浆中血小板源性生长因子对骨组织修复作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）多发性骨髓瘤间充质干细胞TAZ和Wnt/β-catenin基因表达与其成骨潜能相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第1章 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 第2章 实验结果 |
| 2.1 细胞形态学 |
| 2.2 骨髓MSCs的表面标记物测定 |
| 2.3 骨髓MSCs体外成骨诱导细胞茜素红染色 |
| 2.4 融解曲线的分析 |
| 第3章 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 研究生期间成果 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 统计学证明 |
四、肝素钠对骨髓基质细胞增殖及成骨转化的影响（论文参考文献）
- [1]回阳生肌汤和鸡血藤对慢性皮肤溃疡愈合过程中MSCs趋化和迁移功能的调节作用研究[D]. 刘青武. 北京中医药大学, 2021(01)
- [2]新型多孔钽金属的制备及在股骨头坏死治疗中的应用[D]. 谢辉. 大连理工大学, 2019(01)
- [3]生物可吸收PLLA血管内支架对内膜修复和血管重构的影响及其机理研究[D]. 杜若林. 重庆大学, 2019(01)
- [4]富血小板血浆联合高位头颈开窗植骨支撑术治疗围塌陷期股骨头坏死的疗效观察及其相关实验研究[D]. 肖伯莲. 广州中医药大学, 2019(04)
- [5]基于NF-κB及RANKL-RANK-TRAF6信号通路探究异甘草素对骨关节炎的作用及机制[D]. 纪保超. 新疆医科大学, 2018(12)
- [6]同种异体骨髓间充质干细胞复合同种异体冻干骨修复比格犬半侧下颌骨缺损的实验研究[D]. 谭新颖. 中国人民解放军医学院, 2014(03)
- [7]改良富血小板血浆对人骨髓间充质干细胞体外增殖及矿化作用的实验研究[D]. 李斯翰. 南方医科大学, 2014(01)
- [8]OGP对兔骨髓间充质干细胞体外成骨分化干预的实验研究[D]. 吴锐. 昆明医科大学, 2013(02)
- [9]自体PRP对钛表面成骨细胞增殖的影响及PDGF的变化[D]. 杨莉. 河北医科大学, 2012(12)
- [10]多发性骨髓瘤间充质干细胞TAZ和Wnt/β-catenin基因表达与其成骨潜能相关性研究[D]. 王宁. 南方医科大学, 2011(05)